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质子放射疗法是胶质瘤治疗有效方法
  • 　　放射疗法是癌症治疗的重要组成部分，所有癌症患者中约有50％接受电离辐射治疗它也是治疗癌症最有效的方法之一。但是，固有的或获得性的肿瘤放射抗性可能会显着降低放射治疗的疗效。另外，由于不良的脱靶损伤，周围正常组织的相对放射敏感性限制了肿瘤的有效剂量。改善放射疗法的策略应增加对肿瘤的作用或减少对正常组织的作用。由于破坏性DNA是电离辐射的主要作用方式，因此对DNA损伤反应的细胞机制的更好理解有望指导和改善治疗。DNA依赖性蛋白激酶是参与DNA损伤识别和修复的重要激酶之一。DNA小鼠对DNA损伤的修复显着减少，并且放射敏感性增加。DNA的化学抑制或蛋白质表达的下调导致对DNA破坏剂的敏感性增强。然而，由于该激酶的其他生物学功能，在接受治疗的癌症患者中对DNA-PK的全身性和持续性抑制可能导致毒性副作用。由于DNA-PK在DNA损伤反应中的功能受其在多个残基上的可逆磷酸化作用的调控，这些磷酸化残基的特异性靶向可以导致增强的和更具选择性的抗肿瘤治疗。
    　　 推测可能是通过特定残基的去磷酸化作用，几种蛋白质磷酸酶参与DNA-PKcs活性的正调控和负调控。这些包括PP1，PP2A，PP5和PP6。蛋白磷酸酶6是PP2A类蛋白磷酸酶的成员，在真核生物中保守存在并普遍存在。PP6在单元中执行多种功能。在脊椎动物中，PP6催化亚基直接与三个调节性SAPS亚基之一结合，并与三个ANKRD亚基之一结合形成异源三聚体。SAPS在整个真核生物物种中都是保守的，是支持细胞中PP6功能所必需的。先前的研究表明，多种SAPS有助于底物特异性和PP6的不同功能。出国看病网服务机构发现DNA-PKcs的作为SAPS1结合蛋白，并证明在应答DNA损伤激酶活化取决于SAPS1和PP6催化亚基。基于结果，提出枯竭的SAPS1或破坏与DNA-PKcs或PP6C的相互作用可以使肿瘤对放射疗法敏感，而不会引起全身毒性。为了更好地了解缺少SAPS1的后果，在细胞和整个动物水平上开发小老鼠，并将其表型与野生型C57BL亲本小鼠进行了比较。动物发育，生长和生殖健康以及细胞增殖和细胞周期进程不受SAPS1缺失的影响。此外，在暴露于电离辐射或DNA破坏性化学治疗剂后，测试动物和细胞存活，DNA损伤修复以及DDR蛋白质标记的表达/磷酸化。结果表明，SAPS1的丧失在正常条件下不会影响动物的生长发育。然而它损害DNA损伤修复，并使细胞和动物对遗传毒性攻击敏感。综合结果表明，SAPS1可能是抗肿瘤治疗的可行目标。
    　　 SAPS1小鼠的产生是由相关实验室和基因工程鼠模型核心进行的。结果部分中包含该过程的详细说明。使用断奶时通过尾巴剪断获得的基因组DNA以及一组引物NDEL1，SDL2和＃4。将小鼠在通风的笼子中以12小时的光照黑暗周期多次饲养，并随意喂养。所有研究都是在弗吉尼亚大学夏洛特维尔分校的动物保健设施中，将当代突变群体和野生型对照放在同一房间内进行的。所有实验均根据国家指南进行，并获得UVA动物护理和使用委员会的批准。
    　　 Shepherd双铯辐照器用于体内全身辐照，以2Gy每分钟的速度向保持在旋转且通风良好的室内的动物进行辐照。SARRPX射线辐照器用于所有体外辐照，剂量率为3.7Gy每分钟。将八周大的小鼠暴露于9.5Gy全身照射的致死剂量。每天对动物进行监测，并在遇到任何人道终点时通过吸入CO2使其安乐死。根据呼吸窘迫，活动减少或体重减轻>20％来确定濒危动物。通过对数秩比较，将带有生存软件包的GNUR用于Kaplan-Meier生存分析。全身照射两小时后，从安乐死的动物中收获脾脏。使用细胞过滤器和红细胞裂解制备脾细胞的单细胞悬液。抗CD4-PECy7和抗CD8-APCef780抗体偶联物用于细胞表面染色。固定和通透化后，应用抗H2AX-AF488抗体偶联物。流式细胞仪用于定量表达H2AX的CD4细胞。
    　　 从安乐死的动物中收集外周血，并用EDTA保存在旋转的真空管中。通过用冷PBS冲洗并通过细胞滤网，从一个股骨中收集骨髓细胞。用PBS洗涤细胞并保持在4℃。根据仪器的标准程序，使用XP-300自动血液分析仪对血液和骨髓细胞进行计数。手术切除脾脏，制备单细胞悬液，用荧光染料偶联的单克隆抗体进行流式细胞术染色。用DAPI处理的脾细胞区分出活的单细胞，随后根据与淋巴细胞一致的前向和侧向散射特性通过门进行分析。在流式细胞仪上进行分析流式细胞仪，并使用FlowJo版本9软件进行分析。全身照射后4天准备小肠样本。立即切下安乐死的动物的胃肠道，用冰冷的PBS冲洗，钉扎开并固定在10％中性缓冲福尔马林中。将固定的肠段轻轻卷成“瑞士卷”，然后进行石蜡包埋，切片和苏木精/曙红染色。由董事会认证的病理学家对染色的载玻片进行评估。在怀孕的14.5天分离来自亲本野生型和SAPS1基因敲除小鼠的原代小鼠胚胎成纤维细胞。MEF细胞在37°C湿润的5％CO2培养箱中，在补充有10％胎牛血清和1x抗生素的DMEM培养基中生长。将细胞用于第3代和第9代之间的实验。亲代和SAPS1中的细胞周期分布通过流式细胞术进行分析，使用标准碘化丙锭染色检测DNA含量。为了评估细胞增殖，将早期传代的MEF以1000个细胞/孔的密度接种在96孔微量滴定板中，并生长4天。每天从一块板上移出培养基，并将板保存在-80°C直至进行测定。根据制造商的说明将冷冻的细胞解冻，裂解并进行CyQUANT测定。
    　　 将适当数量的产生约50个集落的MEF细胞接种在T25烧瓶中，并使其附着过夜。在室温下照射烧瓶中的细胞，并放回培养箱中14天。固定并用结晶紫染色后，计数可见菌落，并计算存活分数。将数据点拟合到线性二次模型，并计算出a/B比率，SF2和DER37。来自特里·比尔曼博士的慷慨捐赠的新卡他汀，喜树碱和阿霉素溶于无菌PBS或DMSO中，并保存-20°C。在使用前将所有化学药品和药物在培养基中稀释至工作浓度。用指定浓度的药物处理细胞一小时，然后用温PBS洗涤并添加新鲜的无药物培养基。进行单细胞凝胶电泳，并做一些修改。简而言之，收获指数增长的细胞，与低熔点琼脂糖混合，然后应用于彗星玻片。在37°C的完全培养基中过夜恢复后，将载于载玻片上琼脂糖中的细胞进行照射，直接裂解，或在37°C一氧化碳修复培养箱。
    　　 用SYBR绿色染料将载玻片染色10分钟。在荧光显微镜下捕获每个样品至少200个随机选择的细胞/彗星并进行分析。SYBR绿染色的DNA尾部相对于头部的相对长度和强度与单个核中存在的DNA损伤量成正比，并通过尾部矩进行测量。用冷的PBS缓冲液洗涤经辐照或经药物处理的细胞，并直接在2xSDS-PAGE上样缓冲液中裂解。在95°C加热5分钟后，通过凝胶电泳分离细胞蛋白。转移至硝酸纤维素膜后，使用抗H2AX，p53pS15，Kap1pS824，PP6C，SAPS3，ANKRD28，SAPS1和a-微管蛋白，并使用LiCOROdyssey系统可视化/量化。数据表示为至少三个独立实验的平均值±标准误差，除非图中的图例另有说明。对照组和治疗组之间的统计学差异通过学生t检验确定。在p<0.05时差异被认为是显着的。使用GNUR3.6.0进行统计分析和数据绘制。
    　　 出国看病网服务机构与相关实验室签订了合同，为7号染色体上的Ppp6r1基因创建一个小鼠无效基因。插入一个Neo盒带和该基因外显子3-5的两个loxP位点。将靶向的杂种胚胎干细胞显微注射到C57BL胚泡中。将产生的具有高百分比的刺豚鼠皮毛颜色的嵌合体与C57BLFLP小鼠交配，以通过Flp介导的重组去除Neo盒，从而产生flox小鼠。随后，将小鼠与表达Sox2-Cre的C57BL小鼠进行繁育，以去除絮凝的外显子并在外显子6之前产生一个STOP密码子。然后将这些小鼠与C57BL回交超过10代，以得到大于99％C57BL的小鼠。两侧装接loxP和敲除小鼠通过PCR使用NDEL1，SDL2和＃4的混合引物。相比于敲除小鼠中的NDEL1和引物＃4之间的578bp产物，与SDL2和引物＃4之间的298bp的扩增片段表现出了特异性。基于免疫印迹，与野生型相比，在小老鼠的脾脏或肝脏中未检测到与空表型一致的SAPS1蛋白。
    　　 C57BL无效小鼠具有活力，繁殖力，相对于野生型无明显差异。它们在外观和总体体重上与野生型没有区别。先前曾报道SAPS1和PP6C积极调节DNA-PKcs的活性，该酶参与VJ重组和淋巴细胞的发育。因此对血液和骨髓进行了分析，发现从骨髓中回收的循环白细胞，红细胞或存活的有核细胞的数量没有显着差异。此外，发现来自无性或SAPS1空小鼠的脾脏中的B细胞，T细胞亚群或自然杀伤细胞总数无统计学差异。与WTC57BL小鼠相比，SAPS1无效小鼠对全身辐射表现出更高的敏感性。SAPS1无效小鼠仅在IR后平均存活7天，比C57BL野生型小鼠少存活3天，具有统计学上的显着差异。根据IACUC的动物护理和使用要求，并非所有小鼠实际上都死了，但由于体重减轻的程度，必须对其实施安乐死。
    　　 为了探索在小老鼠中提高放射致死率的基础，出国看病网服务机构比较了野生型和SAPS1空小鼠在9.5Gy的WBI后第4天的小肠，与未辐照的对照组相比。由于辐照对组织造成损害，表现为绒毛结构丧失，上皮萎缩和窗格细胞增生。但是，由董事会认证的病理学家仔细检查编码的样本无法区分哪些组织是野生型，还是小老鼠。除了检查小肠外，还分析全身照射后不同天的外周血和骨髓。在9.5Gy的较高剂量下，在三天内检测到了淋巴细胞，红细胞和骨髓细胞的消融，并持续了五天，但是在野生型中观察到的模式没有发现明显差异与小老鼠相比。相比之下，在较低的亚致死剂量全身剂量为2.5Gy时，WBI后三天时淋巴细胞，红细胞和骨髓细胞明显减少，随后在七天后部分恢复，这尤其明显骨髓细胞明显。再次，在野生型或小老鼠中观察到的模式没有明显差异。对电离辐射增强的敏感性可以看作是SAPS1基因敲除小鼠的细胞自主反应。在全身照射两小时后，对小鼠实施安乐死，并收集脾脏。通过负选择分离CD4阳性淋巴细胞，对H2AX进行免疫染色，并通过流式细胞术进行分析、。WT或小老鼠全身照射后，H2AX染色增加了10倍以上。然而相对于野生型，SAPS1无效小鼠的染色增加明显更大。结论是在全身照射后，删除SAPS1会损害体内修复DNA损伤的能力。
    　　 出国看病网服务机构发现来自小老鼠的小鼠胚胎成纤维细胞的行为与来自野生型小鼠的MEF基本上相同。通过免疫印迹验证了与野生型MEF中检测到的SAPS1蛋白相比，来自小老鼠的MEF中不存在SAPS1蛋白。为了进行小鼠SAPS1的免疫印迹，使用集中生产的定制抗体。商业性抗SAPS1抗体在免疫印迹中检测到人类SAPS1蛋白，但在手中无法有效检测小鼠SAPS1。还测试PP6其他亚基的水平是否受SAPS1缺失的影响，并得出结论，MEF至少在催化亚基PP6C和调节亚基SAPS3和ANKRD28中没有显着变化。当在标准组织培养条件下铺板时，野生型和SAPS1均以可比的速度在四天内增殖。此外，使用碘化丙啶染色和流式细胞仪，分析MEF的细胞周期分布，发现野生型和SAPS1之间没有差异。得出结论，MEF的生长和增殖不受Ppp6r1基因敲除的影响。相反，与野生型C57BL絮凝MEF相比，SAPS1对电离辐射的敏感性更高。出国看病网服务机构将克隆形成的存活分数拟合到标准线性二次模型小号。通过2Gy的存活分数从0.625降至0.381和剂量增加比为37％可以证明，SAPS1的丧失增强了细胞的放射效应。生存率为1.585。此外，与野生型MEF相比，适合于SAPS1生存的线性二次模型的a系数显着增加，因此a/B比增加。这表明与C57BL细胞相比，SAPS1空细胞的固有放射敏感性增加。
    　　 接下来，使用单细胞凝胶电泳确定了SAPS1基因敲除对DNA损伤修复的作用。由于电离辐射是多种类型的DNA损伤评估彗星尾矩的增大和减小。正如从克隆形成存活率的降低所预测的那样，观察到SAPS1中DNA修复的统计学显着降低。与来自克隆形成存活和彗星试验的放射增敏证据一致，观察到电离辐射后DNA损伤的存在的磷酸化生物标记物的变化。用2Gy照射后，在5分钟至24小时的不同时间处理MEF样品，并通过免疫印迹进行分析。与野生型相比，在SAPS1中，分析的三种磷蛋白Kap1，p53和H2AX的峰强度均增强，磷酸化水平提高。结论是SAPS1及其相关的PP6磷酸酶参与对电离辐射造成的DNA损伤的信号响应的幅度和持续时间的限制。除了电离辐射外，还使用化学试剂诱导MEF中的DNA损伤。新卡他汀类药物是一种烯二炔抗生素，它通过类似于电离辐射的自由基机制诱导DNA断裂，因此被归类为“放射模拟”。在100nM剂量下，一小时的NCS刺激DNA损伤的标志物，包括Kap1，p53和H2AX的磷酸化。与对辐射的反应相似，相对于野生型MEF，SAPS1中这些磷酸化事件的峰幅度增加。三个独立实验的归一化平均值用于计算图。每个信号的幅度增加是明显的，并且与SAPS1空细胞修复DNA损伤的能力降低相一致。
    　　 喜树碱是DNA拓扑异构酶I的天然生物碱抑制剂，可诱导蛋白质相关的DNA断裂，因为CPT捕获的TOPI裂解复合物会干扰DNA复制和转录。与野生型相比，用10uMCPT处理MEF1小时导致SAPS1-/-MEF中Kap1和H2AX的磷酸化显着增加。阿霉素是一种蒽环素化疗药物，可诱导DNA损伤并抑制II型DNA拓扑异构酶。与野生型MEF相比，在SAPS1空细胞中，用10uMDOX处理MEF1小时会导致Kap1，p53和H2AX的磷酸化升高，并延缓H2AX的去磷酸化。因此，相对于野生型，SAPS1中不同试剂诱导的DNA损伤的反应减少或延迟。类型。敲除细胞不足的PP6C-SAPS1的作用可能是这些靶标的直接去磷酸化，或者可能是上游激酶的部分去磷酸化和失活。但是，重要的是要注意，至少在SAPS1中，DNA-PKcs和ATM的活性没有受到影响，至少通过这些激酶的自磷酸化活性来衡量。
    　　 DNA损伤反应包括一组协调的细胞信号事件，可检测和修复DNA损伤。DDR的破坏被认为是改善抗肿瘤疗法，尤其是放射疗法的可行方法。在DDR中突出的是PI3K家族的三个成员，即ATM，ATR和DNA-PK。这些激酶响应DNA损伤而被激活，其底物的磷酸化增加已成为DDR的生物标记。这些包括最著名的底物H2AX，但其他几种蛋白质也被DDR磷酸化，并广泛用作DNA损伤和修复的报告基因。当然，这些报告基因位点的磷酸化增加可能是由于PI3K家族激酶的激活或相对蛋白质Ser/Thr磷酸酶活性的降低引起的。但是，对这些蛋白质磷酸化酶的关注较少，这些蛋白质使磷酸化并因此调节PI3K家族激酶及其底物。蛋白磷酸酶6是Ser/Thr蛋白磷酸酶之一，在DDR调节中有多种证据。PP6实际上在所有人体组织和衍生的细胞系中都有表达，并且已被证明可以使多种底物脱磷酸，并调节多种细胞过程。从蛋白质组学实验中可以明显看出PP6的多功能性，证明PP6C的敲除会影响Hela细胞中约500种蛋白质的表达。PP6的底物特异性是通过其结合于调节亚基和锚蛋白重复亚基达到。
    　　 出国看病网服务机构发现DNA-PKcs与PP6磷酸酶发生物理结合并受其调控。这种相互作用通过调节亚基SAPS1发生。PP6C或SAPS1的RNAi敲低导致DNA-PKcs的激酶活性降低，DNA修复的降低和神经胶质瘤细胞的放射敏感性增加。在Hela细胞中也已经注意到PP6C与DNA-PKcs的结合以及PP6C耗尽引起的放射增敏作用。但是，SAPS1在DNA-PKcs-PP6C相互作用中的作用以及作为放射增敏靶标的可行性仍未得到充分认识。DNA-PKcs功能突变的丧失阻止了淋巴细胞发育和成熟期间的VJ重组，导致了称为SCID的免疫缺陷疾病。SCID小鼠不发育循环的B或T细胞，其免疫缺陷为研究异种移植肿瘤提供了有价值的模型。因为敲除SAPS1或PP6会损害电离辐射后的DNA修复，并且与DNA-PKcs的激活有关，所以期望SAPS1空小鼠可能具有SCID表型。但事实显然并非如此，实际上感到有些惊讶的是，与野生型相比，SAPS1空小鼠及其衍生的MEF相对正常。与这种对SAPS1缺失的耐受性完全相反的是，最近报道创建PP6C-null小鼠的尝试表明，PP6磷酸酶催化亚基对于植入后的小鼠胚胎发生是必不可少的。在研究中，纯合Ppp6c外显子4缺失的胚泡的内部细胞团显示出显着的生长衰竭，而原发性Ppp6c外显子4缺失的MEF则显示出增殖减少。
    　　 但SAPS1的缺失导致动物及其衍生细胞的放射敏感性增强，这表明SAPS1缺失的细胞具有自主作用。响应电离辐射或产生DNA损伤的化学试剂，体内SAPS1空小鼠和体外SAPS1中的DDR发生显着变化。这些结果与出国看病网服务机构先前在使用RNA干扰进行SAPS1敲除的胶质母细胞瘤细胞系中的观察结果一致。但是，它们与使用Hela细胞进行的类似研究的结果相矛盾，在研究中PP6C敲低后观察放射增敏作用，而SAPS1敲低后未观察到放射增敏作用。可以认为这种差异可能是由于细胞系之间的差异引起的，尤其是与其他细胞系相比，Hela细胞同时表达很高水平的PP6C和SAPS1。另一种可能性是，SAPS2或3可以部分弥补形成PP6全酶时SAPS1的缺乏，并且可能需要敲除多个SAPS才能完全丧失功能。另一方面，催化亚基的敲低不能被其他PPP磷酸酶补偿。
    　　 全身暴露于高剂量的电离辐射下会导致所谓的急性放射综合症，这是由对造血，胃肠道和中枢神经系统的致命伤害所引起的。ARS的类型取决于吸收的剂量和靶器官，并且在WBI后发生的时间也不同。在ARS剂量范围的最低端放射剂量会导致淋巴细胞计数减少，免疫抑制和贫血，最后可能导致骨髓衰竭，出血或感染，并在死亡后10至30天死亡-WBI。除了造血系统，胃肠道也被认为对放射线特别敏感，尽管剂量较高。暴露于610Gy会导致肠细胞耗竭，粘膜屏障破坏和腹泻，主要归因于克隆形成的隐窝上皮干细胞死亡，最终动物在7至14天内死亡。在实验中观察在9.5Gy的WBI后7-14天，对照野生型动物死亡，平均存活时间为10天。SAPS1的丢失将平均生存时间从10天缩短到7天。尽管公认急性放射暴露后7至10天内发生的主要死亡原因是胃肠道受损的结果，对造血或淋巴系统的损害可能导致同一时期动物死亡。在9.5GyWBI时检胃肠道和造血系统中辐射诱发的损伤的变化，但至少通过肉眼检查肠组织或计数活血和骨髓细胞，无法检测到由于SAPS1基因敲除引起的显着差异。即使在较低的WBI下，对SAPS1空小鼠的造血系统的影响也反映对野生型动物的影响。这使出国看病网服务机构困惑为什么删除SAPS1的小鼠为何以及如何遭受加速的体重减轻和死亡。
    　　 最近的报道显示，在2053位用丙氨酸替代丝氨酸的敲入小鼠模型导致放射敏感性适度增加，但突变小鼠保留正常的激酶活性和进行类似于WT的有效VJ重组和类开关重组。与出国看病网服务机构的工作类似，它证明DNA-PKcs在DDR和免疫系统中的功能可以断开。通过SAPS1缺失进行放射增敏的机制尚不完全清楚，但确实涉及到受损DNA修复的延迟，以及包括H2AX在内的DDR标记的磷酸化增加，Kap1和p53。这可能是由于激酶激活增强或磷酸酶活性降低所致。这些磷蛋白标记已被认为是DDR，DNA-PKcs，ATM和ATR中所有三个PI3K的底物。但是SAPS1/PP6仅与DNA-PKcs的激活相关，而与ATM或ATR的激活无关。DNA-PKcs是IR后将这些标记磷酸化的主要激酶，或者PP6也影响ATM和ATR的活性。另外，具有SAPS1亚基的PP6可以使H2AX，Kap1和p53脱磷酸，而SAPS1的缺失会降低这些底物的磷酸酶活性。有报道称PP6直接将H2AX脱磷为底物。关于冈田酸对DDR标记磷酸化的影响的早期报道并不是特别有用，因为该毒素是PP2A和PP6的同等有效抑制剂，或者是包括PP4在内的一般PP2A型磷酸酶。同样，钙调蛋白A或曲霉素对H2AX脱磷酸的抑制作用，因为这些抑制剂靶向多种磷酸酶，所以没有指出负责H2AX去磷酸化的单个Ser/Thr蛋白磷酸酶。尚不清楚PP6是否与Kap1或p53相互作用或使其磷酸化。结果表明PP6C/SAPS1复合物可能参与这种活动。但已经显示，其他几种磷酸酶的下调会导致Ser-824或Ser-473上Kap1磷酸化的时间延长。此外已证明WIP1是2C型镁依赖性蛋白磷酸酶，可以使属于DDR信号网络的几种蛋白上的位点脱磷酸化。除非有人假定除已知的磷酸酶外，PP6C/SAPS1复合物还直接参与了几种不同的DDR标记物的脱磷酸作用，并且对它们的去磷酸化很重要，否则观察到的效果最好用受损的DNA损伤修复来解释在SAPS1单元中。剔除SAPS1的观察结果延迟实际的DNA损伤修复，如辐照过的SAPS1MEF中彗尾分辨力较慢所表明的那样，支持了这一假设。
    　　 DNA损伤反应中的缺陷可通过突变的积累促进肿瘤的发展和进展。但是，可以利用相同的缺陷来增强抗肿瘤治疗。例发现具有同源重组缺陷的PARP抑制剂的合成杀伤力，导致其他DDR因子抑制剂的开发。尝试将DNA-PKcs抑制剂与标准疗法结合使用的尝试在临床前研究中得到显着增强。早期临床试验尚无定论，尽管认为令人鼓舞，SAPS1敲除对细胞和小鼠的相对无害的作用预示着靶向包含SAPS1的磷酸酶不太可能导致有害的副作用。仅在应用放射/化学诱导的DNA损伤后，SAPS1基因敲除的作用才明显。未来，无论是通过药物还是基因疗法，都将靶向SAPS1靶向肿瘤的挑战。了解SAPS1在DNA-PKcs/PP6C复合物活性中的作用DNA损伤修复是开发新的肿瘤致敏方法的第一步。
 
出国看病概况

海外医疗在国外发展较为成熟，比如在欧美等医疗技术发达国家，很多医院都设有国际病人办公室并配备多语种医学专业翻译人员，就医流程和模式都已相对成熟。在国内，海外医疗虽然还属于新兴行业，但发展势头迅猛，发展潜力巨大，市场前景广阔。
　　 从中国经济发展水平和消费能力预测，未来10年时间，海外医疗市场及其相关产业的市场的巨大潜力，有可能超过数百亿美元。
出国看病适应症
靶向药物
 

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