出国看病
 
胶质瘤细胞的生物学行为
  • 　　胶质瘤是最恶性和常见的脑癌，每年导致大量死亡。当前的治疗策略包括手术切除，放疗和化学疗法，它们可以提高神经胶质瘤患者的生存率。由于抵抗力和复发，神经胶质瘤患者的预后仍然令人沮丧，中位生存时间少于15个月。因此，胶质瘤进展的分子机制需要深入研究。并且开发新的治疗靶标是必要的。长非编码RNA是非编码RNA家族的重要组成部分。它们是长度超过200个核苷酸的RNA转录物。越来越多的研究表明，lncRNA与各种人类癌症密切相关。lncRNA的异常表达通常与肿瘤发生有关。lncRNA在癌症中调控着几种生物学过程，包括增殖，分化和转移。例如，lncRNARHPN1-AS1下调抑制了头颈部鳞状细胞癌的生长和转移。LINC00511的上调有助于乳腺癌细胞的增殖和迁移。另外，lncRNAH19下调通过靶向PI3K/AKT信号传导抑制甲状腺癌的存活。FLVCR1-AS1首先被鉴定为肝细胞癌的癌基因。之后，一些参考文献证明了其在其他癌症类型中的致癌作用，包括肺癌，胃癌和卵巢癌。尽管如此，FLVCR1-AS1是否调节神经胶质瘤仍然未知。在研究中，调查了胶质瘤中FLVCR1-AS1的表达模式，并证明FLVCR1-AS1通过靶向miR-4731-5p/E2F2轴促进了胶质瘤的进展。出国看病服务机构的发现为神经胶质瘤的治疗提供了潜在的治疗靶点。
    　　 从医院获得51个神经胶质瘤组织和相邻的配对正常组织。将所有组织在液氮中冷冻。手术前没有组织接受放射疗法和化学疗法。本研究得到医院伦理委员会的批准。从患者获得书面知情同意书。胶质瘤细胞系和人星形胶质细胞系来自美国典型培养物保藏中心。使用含有10％FBS和抗生素的DMEM在37°C和5％CO2培养所有细胞。靶向FLVCR1-AS1的小干扰RNA和阴性对照siRNA购自GenepharmaLtd.。miR-4731-5p模拟物，miR-4731-5p抑制剂和阴性对照miRNA购自RiboBio。根据制造商的指导使用Lipofectamine3000完成转染。使用TRIzol试剂提取总RNA，并使用反转录试剂盒将其反转录为cDNA。然后在7900型快速实时PCR系统下，使用SYBRSelectMasterMix或TaqManMicroRNA分析试剂盒进行qPCR。根据2-ΔΔ相对表达归一化至U6或GAPDH的和计算方法。将细胞铺在96孔板中并培养0小时，24小时，48小时或72小时。然后加入CCK8溶液并孵育2小时。使用BenchmarkPlus微孔板光谱仪测量450nm处的吸光度。
    　　 为了进行集落形成测定，将500个细胞接种到6孔板中并培养14天。然后将细胞用甲醇固定，并用0.1％结晶紫染色。然后计数可见的菌落。如先前报道，使用侵袭实验室进行细胞侵袭和迁移。将FLVCR1-AS1或E2F23'-UTR中的假定的miR-4731-5p结合序列及其相应的突变序列插入pmirGLO载体中，以产生萤光素酶报告载体。然后将细胞接种到96孔板中，并用miR-4731-5p模拟物或指定的荧光素酶报告载体转染。48小时后，使用双重荧光素酶报告基因测定系统测量相对荧光素酶活性，并相对于海肾荧光素酶活性进行标准化。如前所述，使用EZ-MagnaRIP试剂盒进行了RIP分析。所有结果均使用SPSS20.0进行了分析，并表示为平均值±标准误差。使用t检验或单因素方差分析进行统计分析。小于0.05的P值被认为具有统计学意义。
    　　 出国看病服务机构最初根据TCGA数据库研究了FLVCR1-AS1的表达。在胶质瘤组织中FLVCR1-AS1被上调。然后进行qRT-PCR，并证实与正常组织相比，FLVCR1-AS1在神经胶质瘤组织中高表达。此外，FLVCR1-AS1水平在高等级的神经胶质瘤组织中较高。在胶质瘤细胞系中FLVCR1-AS1水平仍被上调。随后调查了FLVCR1-AS1是否可以作为预后的生物标志物。根据FLVCR1-AS1将神经胶质瘤样品分为两组。FLVCR1-AS1的较高表达与较低的存活率相关。为了研究FLVCR1-AS1的生理作用，选择U87和U251细胞用于以下实验。为了避免脱靶效应的风险，出国看病服务机构设计了两个独立的siRNA来使FLVCR1-AS1沉默。在U87和U251细胞中成功敲低了FLVCR1-AS1表达。CCK-8分析表明，FLVCR1-AS1敲低显着抑制了72h时U87和U251细胞的增殖。此外，菌落形成证实FLVCR1-AS1沉默抑制了胶质瘤细胞的增殖。发现FLVCR1-AS1敲低导致更多的神经胶质瘤细胞停滞，表明FLVCR1-AS1在调节细胞周期中起作用。之后，进行侵袭实验测定以检查FLVCR1-AS1对转移的影响。出国看病服务机构发现，FLVCR1-AS1的敲低显着减少了迁移和入侵的数量。因此，FLVCR1-AS1在神经胶质瘤中起致癌作用。
    　　 以前，FLVCR1-AS1被鉴定为miRNA海绵。通过生物信息学分析，还发现FLVCR1-AS1可能是miR-4731-5p的潜在海绵。通过FLVCR1-AS1中反应元件的突变进行了突变荧光素酶报告基因。萤光素酶报告基因检测表明，在U87和U251细胞中，miR-4731-5p模仿物均抑制了FLVCR1-AS1-WT的活性。RIP分析表明，FLVCR1-AS1和miR-4731-5p富含抗Ago2组。FLVCR1-AS1敲低导致miR-4731-5p表达增加。通过生物信息学分析进一步预测了miR-4731-5p的靶基因。E2F2的得分最高。然后，出国看病服务机构构建了E2F2荧光素酶报道分子。miR-4731-5p模拟物显着抑制了E2F2-WT报告基因的活性，但没有抑制突变体的活性。miR-4731-5p模拟物可抑制E2F2表达。出国看病服务机构发现FLVCR1-AS1敲低导致E2F2表达下调，这被miR-4731-5p抑制剂逆转。此外，在胶质瘤组织中，FLVCR1-AS1与miR-4731-5p之间或miR-4731-5p与E2F2之间存在逆表达关系。两者合计，FLVCR1-AS1充当miR-4731-5p的分子海绵，以上调E2F2表达。
    　　 此外，根据TCGA数据库和qRT-PCR分析，出国看病服务机构发现神经胶质瘤组织中E2F2表达增加。为了确定FLVCR1-AS1是否通过E2F2发挥作用，进行了拯救试验。发现FLVCR1-AS1的下调会阻止U87和U251细胞的增殖，集落形成，迁移和侵袭。但是，E2F2的恢复消除了FLVCR1-AS1沉默介导的作用。此外，与si-NC+Vector组相比，si-NC+oeE2F2组的神经胶质瘤细胞的增殖，迁移和侵袭得到增强。总之发现表明，FLVCR1-AS1通过靶向miR-4731-5p/E2F2轴促进神经胶质瘤的进展。已经显示出几种lncRNA参与神经胶质瘤的发生和发展。其中许多被认为是诊断或治疗靶标的潜在生物标志物。例如，lncRNALINC00526通过AXL抑制神经胶质瘤的增殖和发展。LncRNASCAMP1沉默通过调节miR-499a-5p/LMX1A/NLRC5信号传导抑制神经胶质瘤的增殖，迁移和侵袭。lncRNASNHG1通过使miR-194海绵化以上调PHLDA1水平，促进神经胶质瘤的发生和发展。在研究中发现FLVCR1-AS1在神经胶质瘤组织和细胞系中明显上调。FLVCR1-AS1上调与脑胶质瘤高级别和预后不良有关。此外证明了FLVCR1-AS1抑制可抑制神经胶质瘤的进展。
    　　 已经发现FLVCR1-AS1在几种肿瘤中被上调，包括肺癌，胃癌和卵巢癌。最近的报告也证明FLVCR1-AS1促进胆管癌细胞的增殖，迁移和侵袭。但是，FLVCR1-AS1在神经胶质瘤中的功能仍然难以捉摸。在这项研究中发现神经胶质瘤组织中FLVCR1-AS1的表达明显上调。FLVCR1-AS1过表达也预示了不良预后。此外，进行了CCK8，集落形成和侵袭实验分析，证明FLVCR1-AS1通过促进细胞增殖，迁移和侵袭而作为癌基因。LncRNA是潜在的miRNA海绵。并且一些报道表明FLVCR1-AS1具有miRNA海绵的能力。FLVCR1-AS1使miR-513c海绵促进肝癌的增殖和转移。发现FLVCR1-AS1使miR-573海绵增加E2F3表达并促进肺癌生长。此外，FLVCR1-AS1还报道作为胃癌为的miR-155的海绵，的miR-485-5p在胆管癌。看起来FLVCR1-AS1可以在不同类型的癌症中吸收特定的miRNA。在研究中发现FLVCR1-AS1无法调节上述报道的miRNA。但证明FLVCR1-AS1与miR-4731-5p相互作用并抑制其在神经胶质瘤中的表达。MiR-4731-5p是鲜有研究的新miRNA。只有一项研究暗示miR-4731-5p是黑色素瘤的抑癌药。出国看病服务机构的研究首次表明miR-4731-5p抑制神经胶质瘤的发展。
    　　 此后还确定E2F2被miR-4731-5p靶向。表明FLVCR1-AS1通过抑制神经胶质瘤中的miR-4731-5p促进了E2F2表达。E2F2是几种癌症中众所周知的癌基因，例如胰腺癌，骨肉瘤和肺癌。此外，证据表明E2F2参与神经胶质瘤的肿瘤发生。与之前的研究一致，还发现E2F2在神经胶质瘤组织中上调。E2F2的恢复逆转了FLVCR1-AS1敲低的作用。E2F2的过表达促进神经胶质瘤的进展。总而言之，研究发现FLVCR1-AS1在神经胶质瘤中被上调，并通过充当miR-4731-5p的分子海绵发挥上胶致癌作用，从而上调E2F2水平。出国看病服务机构的发现表明，FLVCR1-AS1/miR-4731-5p/E2F2轴可能是神经胶质瘤的潜在治疗靶标。
 
出国看病概况

海外医疗在国外发展较为成熟，比如在欧美等医疗技术发达国家，很多医院都设有国际病人办公室并配备多语种医学专业翻译人员，就医流程和模式都已相对成熟。在国内，海外医疗虽然还属于新兴行业，但发展势头迅猛，发展潜力巨大，市场前景广阔。
　　 从中国经济发展水平和消费能力预测，未来10年时间，海外医疗市场及其相关产业的市场的巨大潜力，有可能超过数百亿美元。
出国看病适应症
靶向药物
 

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