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胶质瘤中肿瘤细胞生长和侵袭
  • 　　由正常神经胶质细胞引起的神经胶质瘤是全世界最常见的颅内肿瘤类型之一，预后不良。它的特征是生长失控，这归因于肿瘤细胞的无限增殖。在过去的几十年中，其死亡率一直在下降，但其发病率一直在增加。许多患者患有晚期和转移性疾病。对于具有可手术切除的神经胶质瘤的患者，手术具有治愈的意图。尽管进行了深入的研究，但诊断，预后或对治疗反应的早期标记仍存在争议，很少有标记被验证并在常规临床实践中被发现。环状RNA是一类RNA转录本，不包含编码蛋白质的开放阅读框。最近，越来越多的证据表明，circRNA通过调节染色质修饰，转录和转录后调节水平的基因表达，在癌症进展中起关键作用。几项研究已经发现，各种circRNAs的功能障碍密切相关的增殖，凋亡，迁移，侵入，和药物的肿瘤细胞的抗性。因此，circRNAs可能代表具有潜在的生物标志物，在人类癌症中具有诊断，预后和治疗价值。然而，circRNA与神经胶质瘤细胞进展之间的关系仍然难以捉摸，从circRNA的角度出发，有必要阐明开发新型治疗靶标的潜在分子机制。神经胶质瘤组织中circ-POSTN比通过高通量circRNA微阵列筛选的非肿瘤组织上调。Circ-POSTN位于chr13：38136718-38161065，转录长度为2656个核苷酸。据出国看病网研究人员所知，尚未对这种circRNA进行研究。在该项目中，Circ-POSTN被确定在神经胶质瘤中过表达，而circ-POSTN的上调与更大的肿瘤大小，更高的世界卫生组织等级以及神经胶质瘤患者的总体生存期短有关。circ-POSTN通过使miR-1205海绵化而促进了肿瘤细胞的生长和转移特性，并抑制了细胞凋亡。两者合计，该项目的结果表明神经胶质瘤的潜在治疗靶标。
    　　 在2012年1月至2014年1月之间，采集了58例切除的神经胶质瘤样本和相匹配的非肿瘤组织。研究人员的组织样本实验获得了本医院伦理委员会的授权。将组织标本保存在液氮中直至RNA分离。人神经胶质瘤细胞和正常细胞细胞中心获得或保存在研究人员的实验室中。这些细胞系用含10％胎牛血清维持，并在5％CO2中于37°C培养。为了检测神经胶质瘤组织和细胞中circ-POSTN的水平，进行了定量逆转录聚合酶链反应。使用TRIzol试剂分离总RNA。通过PrimeScriptRT试剂盒进行逆转录，并根据制造商的指导用SYBRPremixExTaq进行互补DNA扩增。甘油醛3-磷酸脱氢酶或U6用作内源性对照。将转染的细胞以2×10细胞/孔的速度种植在96孔板中，并培养0、24、48、72和96小时。细胞活力用CellCountingKit-8进行测量，然后按照制造商的建议进行测量。通过酶标仪在450nm处检测每个孔的吸光度。对于菌落形成实验，将等量的转染细胞接种在2.5cm培养皿中并培养约12天。然后，将可见的菌落用低聚甲醛固定，通过晶体破坏染色并计数。用指定的小干扰RNA转染培养的细胞48小时。然后，将转染的细胞用啶橙染色溶液进行两次染色。在倒置荧光显微镜下评估细胞凋亡。
    　　 为了分析细胞转移特性，将LN229或U251细胞用无血清培养基分离，并装入Transwell单元的上部室中。将下部室添加到含有10％FBS的介质中。温育24小时后，将过滤器下表面的细胞用低聚甲醛固定，并用结晶晶体染色。通过退火双链DNA并将其插入pmirGLO载体，构建了包含miR-1205特异性结合位点的野生型circPOSTN载体和包含miR-1205突变位点的突变片段。使用Lipofectamine3000试剂进行转染，转染后24小时，按照制造商的操作规程进行荧光素酶活性测定。使用GraphPad5.01软件进行统计分析，数据以均值±标准差表示。学生t检验和Fisher精确检验用于评估两组之间的差异。对于两个以上的组，比较通过单因素分析进行分析。使用Kaplan-Meier分析绘制生存曲线和复发曲线，并使用对数秩检验检验其统计显着性。P?<0.05被认为具有统计学意义。
    　　 为了研究circ-POSTN在神经胶质瘤中的表达，研究人员检测了58例神经胶质瘤患者的肿瘤组织和非癌组织标本中的circ-POSTN表达。CIRC-POSTN在胶质瘤标本相对于在非肿瘤配对组织。此外，在神经胶质瘤细胞中circ-POSTN的表达明显高于NHA细胞。根据circ-POSTN表达水平的平均值，将58名入组患者分为高组和低组。肿瘤大小和WHO分级是与circ-POSTN表达相关的两个因素。为了确定circ-POSTN在神经胶质瘤中的预后价值，通过Kaplan-Meier生存分析和对数秩检验分析了circ-POSTN水平与OS的相关性。结果显示，与circ-POSTN表达水平低的患者相比，circ-POSTN表达水平高的患者OS短。因此，推测circ-POSTN可能是神经胶质瘤的癌基因。为了提供circ-POSTN在神经胶质瘤中的关键作用的直接证据，用siRNA敲低了LN229细胞中circ-POSTN的表达。还上调了U251细胞株的circPOSTN水平，以避免脱靶效应。Circ-POSTN过表达质粒显着增加了U251细胞株中circ-POSTN的水平。从功能上讲，细胞计数试剂盒-8和克隆形成实验表明，沉默circ-POSTN可以抑制LN229细胞活力和克隆形成。circ-POSTN的过表达显着提高了U251细胞的增殖能力。此外，双重染色法还表明，通过下调circ-POSTN可以显着增加凋亡细胞的数量。而circ-POSTN的过表达减弱了U251细胞系中的细胞凋亡。沉默circ-POSTN还抑制了LN229细胞的转移特性，并且过表达的circ-POSTN促进了U251细胞系的细胞迁移和侵袭能力。circ-POSTN表达上调促进了神经胶质瘤细胞的进展。为了解决circ-POSTN增强神经胶质瘤细胞增殖和转移特性的机制，选择了circ-POSTN可通过环形RNA相互作用组数据库进行筛选的microRNA。将miR-1205确定为circPOSTN的潜在下游目标。在神经胶质瘤组织标本中检测到了miR-1205水平，并与相邻的非肿瘤组织相匹配。结果发现，在肿瘤组织中miR-1205显着降低，这与circ-POSTN水平相反，两个预测的结合位点在LN229和U251细胞中均通过双荧光素酶报告基因分析得到了功能验证。研究人员通过进行抢救分析检测了circPOSTN的致癌功能是否部分归因于其对miR-1205的抑制作用。在LN229细胞系中，circ-POSTN沉默可显着提高miR-1205水平，与miR-1205抑制剂共转染可部分降低miR-1205的表达。从功能上讲，使用CCK-8凋亡检测和transwell入侵实验进行了拯救试验。研究人员发现，与miR-1205抑制剂共转染后，si-circ-POSTN的肿瘤抑制作用显着逆转。此外，由circPOSTN载体诱导的致癌特性可通过miR-1205模拟物部分挽救。
    　　 脑胶质瘤是人类的难治性恶性肿瘤，通常对常规化学疗法和放射疗法不敏感。复发和远端转移仍然是克服这种致命疾病的主要问题。胶质瘤生长和进展的机制尚不清楚。因此，分子靶向治疗在神经胶质瘤的治疗中特别重要。CircRNA是一类非编码RNA，与多种疾病的发病机理密切相关。hsa_circ_0007059预测预后和影响通过AKT的在口腔鳞状细胞癌的恶性行为。胶质瘤组织中circ-POSTN的表达比通过高通量circRNA微阵列筛选的非肿瘤组织增强。分别在胶质瘤组织标本和细胞中分别与非癌组织和正常细胞系相比显示了它的升高。此外，circ-POSTN水平的升高预示着神经胶质瘤患者的临床结局较差，包括肿瘤更大，WHO分级更高，OS缩短。但是，circ-POSTN在神经胶质瘤中的独立预后价值受到样本数量和方法学的限制。为了研究circ-POSTN在神经胶质瘤中的生物学后果，进行了功能丧失研究。circ-POSTN在神经胶质瘤细胞中执行了致癌功能。越来越多的证据表明，circRNA可以通过竞争内源性RNA与miRNA相互作用。circ_0001946可以作为一个CERNA到通过调节的miR-671-5p和CDR1在转录后水平上抑制胶质母细胞瘤的进展。假设circ-POSTN可能作为胶质瘤中miR-1205的ceRNA。进行了荧光素酶报告基因和拯救试验，发现circ-POSTN可以使miR-1205产生胶质瘤的恶性进展。发现miR-1205的下调和miR-1205的上调可以防止某些人类癌症的肿瘤进展。例如升高的hsa_circ_0002052通过调节miR-1205轴抑制catenin途径，从而减弱骨肉瘤细胞的生长，迁移和侵袭。circ_0034642可通过胶质瘤中的miR-1205海绵化来上调BATF3水平并促进细胞进程。证明了circ-POSTN作为胶质瘤细胞中与miR-1205相互作用的ceRNA，而circ-POSTN的致癌作用部分归因于其对miR-1205的调节。但是，由于招募的患者数量有限，因此本研究未研究独立的预后作用。此外，本研究未探索miR-1205的靶标，在未来的研究中仍需要进行分析以进一步揭示信号传导的机制。总之，目前的研究表明，circ-POSTN在脑胶质瘤中高表达，并且与中国脑胶质瘤患者的肿瘤大小，WHO等级和OS相关。此外，高circ-POSTN表达水平可通过使miR-1205海绵化来促进癌症的扩散和侵袭。这项研究可能为神经胶质瘤的治疗提供一个新颖有效的靶标。
 
出国看病概况

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　　 从中国经济发展水平和消费能力预测，未来10年时间，海外医疗市场及其相关产业的市场的巨大潜力，有可能超过数百亿美元。
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靶向药物
 

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