出国看病
 
木黄酮是一种抗胶质瘤药物
  • 　　金雀异黄素是大豆的主要异黄酮之一，具有重要的抗氧化和抗肿瘤活性。这些生物学效应在很大程度上受Gen化学结构和分子相互作用的影响。存在羟基有氧取代基，共轭的双键以及B环处的邻苯二酚部分有利于Gen自由基清除和金属螯合机制。两个羟基对于抑制肿瘤细胞的生长都很重要。Gen在几乎所有癌细胞系中均具有显着的抑制作用。在脑癌的背景下，Gen促进了人类胶质瘤细胞系的细胞周期停滞和凋亡，抑制了表皮和血小板衍生的生长因子的活性以及拓扑异构酶II的活性。对于多形性胶质母细胞瘤过程，已知三羟基黄酮的抗增殖作用和抗氧化特性之间存在适度的关系。的确，多酚对癌症细胞内的氧化还原状态有重要影响，支持抗氧化剂和促氧化剂的活性。然而，Gen对脑肿瘤的疗效有限，仍然是一个挑战，因为它在血脑屏障中的可利用性和向中枢神经系统的传递能力差。
    　　 出国看病网发现，Gen对氧化敏感，其在水中的溶解度低于1ug每毫升。作为水溶性差的异黄酮，Gen可以被封装并溶解为两亲性载体。不同的纳米载体已被用于癌症治疗中的Gen传递，例如聚合物纳米粒子，胶束乳液和基于脂质的纳米乳液。如今，脂质体具有生物相容性，是脑药物输送应用中研究最多，最有前途的系统。尽管脂质体载药已被批准用于脑肿瘤的临床试验，但可能完全穿过血脑屏障的脂质体系统的设计仍在研究中。由包裹在磷脂酰胆碱/胆固醇基脂质体内的阿霉素组成，目前已针对多形性胶质母细胞瘤进行了测试。因此，考虑到Gen的功效是抗肿瘤物质，以及基于磷脂酰胆碱的脂质体可以穿越BBB，对Gen/磷脂酰胆碱的脂质体复合物的理化性质进行表征非常有希望，这可能会影响系统中的药代动力学和药代动力学。实际上，有强有力的证据表明，与游离形式的Gen相比，Gen负载脂质体具有更高的亲脂性，从而促进了BBB的穿越。
    　　 磷脂酰胆碱根基于脂质体的物理化学特性，但很少有作品考虑使用抗神经胶质瘤或胶质母细胞瘤的方法。上述研究可能有助于设计一种有效的基于Gen的药物输送系统，用于神经胶质瘤治疗。对于脂质体设计，材料的选择，层状性和尺寸定义了诸如系统渗透性，稳定性，药物包封效率和释放动力学之类的特性。以前，含有Gen的不饱和大豆芦荟素脂质体的理化性质，并将其与体外相关联。抗氧化和细胞毒性活性。这些系统由多层大囊泡组成，与纯脂质体相比，分子包装更高，抗胶质瘤细胞系的细胞毒活性也高于不含Gen的脂质体。然而，已知不饱和脂质的存在损害了系统稳定性。此外，在生物体中，较低熔点的脂质的网状内皮吸收率高于较高熔点的脂质。另一方面，饱和和对称的脂质可以为脂质体系统提供更高的分子包装，从而增强系统稳定性。脂质体的稳定性也受层状性的影响，因为这对脂质体的平均体积直径具有重要作用。在这种情况下，考虑到平均体积直径，电势值和pH值的维持，基于磷脂酰胆碱的单分子大囊泡比MLV具有更好的物理稳定性。但是，在单层囊泡中，系统大小可能会损害其稳定性。例如，核心半径大于几百纳米的单层脂质体比半径小于100nm的单层脂质体更稳定。这可能与脂质体大小对系统表面曲率和结构不对称性的影响有关。例如，小的单层囊泡的曲率要高于LUV或MLV，因此，与其内部结构有关的不对称性也更高。结构的对称性和表面曲率也会影响药物的分布及其对膜的影响程度。
    　　 以前，DMPCSUV用于通过荧光和ESR光谱学研究Gen与脂质膜的位置和相互作用。考虑到上述层状性和尺寸对稳定性和药物分布的影响，以及LUV似乎更能抵抗渗透压引起的变形，因此更适合于药物递送应用，重要的是表征含有Gen的DMPCLUV的理化特性。为此，假设Gen在脂膜中可溶也很重要。因此，在这项工作中，通过水平衰减全反射傅里叶变换红外光谱，P核磁研究了Gen饱和浓度及其对DMPCLUV特定基团的水合度，旋转脂质运动，相态和阶数的影响。共振，H核磁共振，差示扫描量热法，紫外可见光谱和动态光散射技术。为了将分子相互作用数据与侧重于神经胶质瘤治疗的系统生物学特性相关联，在体外还进行了抗氧化剂和抗肿瘤试验。测试了系统还原电位对二苯基-吡啶-肼基的抑制作用，并通过MTT分析评估了其对鼠神经胶质瘤细胞的杀伤活性。
    　　 胎牛血清和Dulbecco改良的Eagle培养基购自InvitrogenCo.。脂质无需进一步纯化即可使用，而所有其他化学药品均为分析纯。实验部分报告了载有Gen的DMPC脂质体的制备及其上的Gen定量，其理化性质及其生物学活性。
    　　 单层大囊泡通过反相蒸发法制备。DMPC与1000uL氯仿和20uL蒸馏水共溶解。将所得乳液超声处理2分钟，以产生反胶束的均匀分散体。使用旋转蒸发仪在真空下蒸发溶剂。将所得的有机凝胶或脂质膜置于干燥器下，以蒸发痕量溶剂，然后将其与1000uL蒸馏水水合。此后，通过涡旋将有机凝胶重悬以获得脂质体。在氯仿/脂质共增溶步骤中，将Gen掺入脂质体中，初始Gen：DMPC比率为0.0至0.20。将所有脂质体进行三个冻融循环。简而言之，制备脂质体，添加不同的初始Gen浓度，表示为Gen：DMPC摩尔比。脂质体制备后，通过洗涤和离心程序除去未封装的Gen。然后，用TritonX-100表面活性剂处理脂质体沉淀以溶解膜。通过UV-2550Shimadzu分光光度计在262nm处定量来自脂质体的Gen外流。根据比尔定律，认为对应于35,842M-1cm-1的Gen摩尔吸收率可以计算载有脂质体的Gen浓度。还进行了不带TritonX-100和不带Gen的对照试验。对于每个Gen：DMPC比率，进行了五个独立实验的三次重复。
    　　 HATR-FTIR技术用于研究Gen对极性，界面和非极性脂质体基团的水合度，振动，旋转和平移参数的影响。使用ShimadzuIRPrestige-21设备在DMPC脂质体中单独或含Gen，以最大脂质体负载浓度进行HATR-FTIR实验。将干涉图平均50次扫描，记录在400至4000cm-1的频率范围内，分辨率为2cm-1。通过ShimadzuIR溶液软件1.5分析光谱。从获得的光谱中，检测到特定脂质基团的轴向拉伸峰。考虑到Gen诱导的脂质伸展峰的频率和带宽变化，分析HATR-FTIR光谱。带宽测量与峰高位置3/4处的直线基线有关。31P和1HNMR用于研究DMPC脂质体磷酸酯和胆碱基团以及亚甲基基团的旋转运动。在31脂质体在162MHz下，使用重水作为外部参考。在以下条件下获得光谱：脉冲时间15.05us，循环延迟4s，质子去耦，2048次扫描。1H纵向松弛时间测量是在20MHz的400MHz下进行的。使用水：氘水以0.2至102.4s的时间延迟，14us的时间脉冲，8次扫描执行反转恢复脉冲序列/v）作为溶剂。化学位移以0ppm处的TSP信号为参考。
    　　 为了研究Gen在与DMPC脂质体酰基链有关的热力学参数中的Gen效应，进行了DSC测量。通过ShimadzuDSC-60设备对单独或含有Gen的DMPC脂质体进行DSC分析。事先使用铟对设备进行了校准。在氮气流量下，温度从5°C到60°C，加热速率设置为5°C/min。在这些条件下，分析误差估计为0.5°C。一个空的铝电池用作参考。从曲线中点获得相变温度。从DSC峰下面积的积分中获得焓变值。为了研究Gen分别对DMPC脂质体的极性区域取向和粒径的影响，进行了Zeta电位和尺寸测量。因此，单独或负载Gen的DMPC脂质体以50mg每毫升的DMS脂质体进行DLS测量，其中异黄酮的最高异黄酮浓度负载于脂质体中。由MalvernInstruments的ZetasizerNano系列在25°C下进行测定，光程为1.0cm，检测角度为90°，分散介质粘度为0.894mP，折射率为1.33。样品稀释液中使用了Milli-Q水。Gen对DMPC脂质体的浊度促进作用是在脂质体中以30mg每毫升脂质进行评估的，脂质为纯脂质或负载有不同Gen浓度，以达到最初的Gen：DMPC比率为0.0至0.13m/m）。使用ShimadzuUV-2550紫外可见分光光度计在400nm波长，20°C下进行了实验。石英池的光程为1.0cm。对于每个包含不同Gen：DMPC比的样品，准备并分析了三个独立的样品。
    　　 通过比色试验2.2-二苯基-1-吡啶甲基肼评估了游离形式和Gen负载脂质体的抗氧化活性。脂质体浓度相当于30mg每毫升，Gen浓度范围为0.0mg每毫升至3.6mg每毫升。因此，将游离的和Gen-负载的脂质体与1mM甲醇溶解的DPPH孵育40分钟。温育后，在ShimadzuUV-2550分光光度计中在515nm处检测样品的光密度。对于每个样品，至少准备并分析了三个独立的实验。大鼠恶性GBM细胞系获自美国典型培养物保藏中心。细胞生长并维持在低葡萄糖的Dulbecco改良的Eagle's培养基中，该培养基含有0.1％的真菌区和100U/L的青霉素/链霉素，并补充了10％的FBS。将细胞在含5％CO2的潮湿气氛中保持在37°C。在治疗前24小时，将胶质瘤细胞以5×103细胞/孔的密度接种在96孔板中的DMEM/10％FBS中。将培养物暴露于DMPC48小时。仅用媒介物处理对照细胞。所有实验均一式三份进行。
    　　 处理后48小时结束时，进行了细胞计数，从而有可能估算每个孔中的活细胞数。将细胞与Tripsin解离后，从每个孔中取100uL等分试样，在Neubauer室中计数。同一研究者在立体显微镜下进行观察。
    　　 在第2.10.2节中所述的处理后，通过MTT分析检测了载有Gen的脂质体的细胞毒性。MTT方法根据线粒体将MTT还原为甲maz的产物的能力来估计细胞活力。将MTT溶液以0.5mg/mL的终浓度添加到孵育培养基中。将细胞在湿润的5％CO2气氛中于37°C放置60分钟。然后除去培养基，并将板与DMSO一起摇动30分钟。在492nm处测量每个孔的光密度，并将结果表示为吸光度。在所有实验中，除了与相关的测定外，结果均显示为来自三个独立实验的三份平均值。为了进行多重比较，对与抗氧化剂和抗肿瘤分析有关的数据进行了单向方差分析，然后进行了事后检验的Dunnett和Tukey–Kramer。当p<0.05时，平均值之间的差异被认为是显着的。
    　　 脂质体制备中所用的载有脂质体的Gen浓度与Gen：DMPC初始比率的函数关系。从脂质体制剂中添加的活性物质的初始浓度与加载到系统中的浓度之间的关系，可以检测出活性物质在脂质体中的饱和浓度。可以将其定义为研究变量具有惯性关系之前的最后浓度。达到饱和点后，脂质体中的Gen浓度降低。在较高测试的Gen：脂质比率中观察到了此行为，该比率等于0.16和0.20。因此，负载的脂质体-Gen饱和浓度对应于357.00±17.8uM，与最初的Gen：脂质比率0.13有关。在相同的Gen：脂质饱和比下，基于大豆Aslectlectin的MLV中，Gen饱和浓度比DMPCLUV高26％。已知MLV比LUV和SUV能够封装更高浓度的活性物质。然而，如前所述，存在这样的风险，即，较小的膜在储存期间会逸出被封装的物质。在这项工作中，Gen饱和浓度用于DMPC系统的所有后续物理化学表征。
    　　 如前所述，通过HATR-FTIR研究脂质体中所有DMPC区域的水合度和运动自由度。与脂质极性区域组相关的HATR-FTIR数据得到了补充，并被补偿为31P和1HNMR结果以及电位系统值。对于脂质疏水区域，对DMPC亚甲基获得的HATR-FTIR结果用1HNMR和DSC数据进行了补充。通过浊度和大小分析讨论了Gen促进脂质体的整体作用。
    　　 为了获得有关膜中Gen位置及其对DMPC特定区域动力学影响的初步信息，使用了HATR-FTIR技术。获得了空脂质体和含有357.00uMGen的脂质体的HATR-FTIR光谱
    　　 DMPC脂质体的HATR-FTIR光谱不艮呈现伸缩振动。通过载有Gen的脂质体和空脂质体的FTIR差异光谱，这是可以分配一些根峰。考虑到GenFTIR峰，Gen和DMPC光谱之间似乎没有峰重叠。关于每个脂质体区域中的Gen效应，对光谱进行了解释。为了获得有关异黄酮对DMPC动力学影响的更多详细信息，将HATR-FTIR结果与通过NMR，DSC和UV-vis技术获得的数据进行了补充。这种峰分裂与膜中存在水合和非水合脂质磷酸基团有关。众所周知，相邻的磷脂极性头的组装是通过磷酸盐和胆碱部分之间的偶极/静电相互作用而发生的，这使脂质体介质具有高极性。较低频率的肩峰表明存在水合磷酸盐基团，这是弱磷酸盐-胆碱相互作用的结果。表明异黄酮在脂质极区促进不同氢键幅度，因此，影响相邻的脂质极性头部相互作用强度。这些不同的氢键强度可能与脂质磷酸酯和Gen羟基之间以及磷酸酯基团和水之间的相互作用有关。
    　　 异黄酮还增加了4.42厘米峰值频率，其与外源分子的相互作用可能反映在取向和水合程度。Gen诱导的增加-频率表明异黄酮导致脂质磷酸酯基团和水羟基原子之间的氢键数量减少。因此，Gen降低了脂质磷酸区域的水合度。在大豆中大豆凝集素脂质体中也观察到了这种行为。含有或不含Gen的DMPC和芦荟素脂质体均被分析为水性悬浮液。在HATR-FTIR相反根诱导作用观察到的峰在DPPC脱水膜中，其中水不可能通过羟基促进氢键，表明Gen与脂质膜之间存在直接氢键。因此，在DMPC脂质体中，似乎Gen与水羟基之间存在竞争以与脂质磷酸区域相互作用。氢键的形成需要供体和受体基团之间足够的排列和距离。因此，氢键分子数量的变化直接影响脂质的行为。具有脂质极性头基团的类黄酮氢键的形成与脂质空间排列的变化和分子堆积的减少有关。
    　　 为了证实这一假设，带宽分析相关HATR-FTIR进行。研究的脂质极性基团的DMPCHATR-FTIR带宽值描述。带宽变化反映了旋转，平移或碰撞运动，以及与脂质基团有关的幅度和速率。在膜研究中，脂质基团FTIR带宽的增加与其运动自由度成正比。Gen将DMPC带宽降低了5.93cm-1。HATR-FTIR带宽结果表明Gen导致了DMPC磷酸基团迁移率的限制。由于Gen减少了DMPC磷酸氢键的数量，因此可能与膜堆积的改善相关联，并限制了脂质极性区域的运动。通过31PNMR线宽分析研究了DMPC磷的相态和脂质极性头的可能流动性。仅与DMPC脂质体相关的31PNMR谱图，载有Gen31PNMR峰形的谱图可能表明膜相态。另外，峰线宽度测量提供关于核的化学位移各向异性，定义为化学屏蔽张量分量o之间的距离的信息。因此，CSA与极头水平的流动性和旋转直接相关。实际上，NMR线宽与分子迁移率或构象变化有关。限制运动的磷基团反映了宽广的31PNMR共振，而具有较高运动自由度的原子核给出的原子团较窄。31个中所示的PNMR峰在低场的宽肩，并在高场，这是典型的层状相的膜的，以脂质双层的形式组织。因此，脂质体中Gen的存在不会改变系统相态。在31PNMR线宽与在DMPC脂质体磷单独44.44ppm的表示。代的插入入脂质体中没有显著的改变31PCSA表示。因此，DMPC磷酸盐运动自由的Gen诱导的变化似乎与氢键的减少有关，与基团的相态或旋转速度无关。
    　　 胆碱基团-随着到脂质体胆碱区域方面，基于创的影响没有观察到HATR-FTIR频率变化。然而，根增加了FTIRv3由4.74厘米带宽。这表明Gen影响了该脂质极性区域的行为。为了更好地理解Gen对脂质胆碱运动的影响，在胆碱峰处进行了1HNMRT1测量。FID信号恢复从这些曲线算出T1值。对于空的DMPC脂质体，胆碱1HT1对应于2.239s。当Gen被装载到脂质体中时，该值增加到3.114s。1HT1个差反映了脂质组运动的变化，如旋转。实际上，对于LUV，T1与相关时间成比例关系，相关时间是原子核旋转1rad/s所需的时间。T1增加39％表示胆碱旋转运动受到限制。
    　　 为了评估Gen在脂质极性取向中的作用，获得了电位数据。这些数据对应于在基因存在下DMPC的-38.2±0.4mV和DMPC的-37.1±0.5mV。脂质电位zeta的更多负值和正值变化表明双层平面的重新定向上端，与脂质磷酸酯和胆碱组。异黄酮不会改变DMPC的电位zeta值，因此不会改变磷酸酯或胆碱基团的取向。因此，Gen似乎通过其羟基的相互作用来限制DMPC磷酸酯和胆碱区域的运动。由于未检测到脂质极头取向的变化，因此DMPC磷酸酯基团的限制可能与Gen促进的氢键与水的减少有关，并且脂质Gen偶极诱导了胆碱旋转速率的降低。
    　　 Gen引起的vCO频率没有变化。正如在v的情况下PO2，在变化vC0振动反映羰水合程度变化。因此，Gen不会引起DMPC羰基氢键数量的变化。Gen引起的FTIRv带没有明显变化，这表明异黄酮对DMPC界面区域迁移率没有影响与Gen相互作用后与DMPC酰基链亚甲基的行为相关的HATR-FTIR结果。异黄酮促进了4.51厘米减少-1的DMPCvCH2并没有改变vCH2频率值。CH2拉伸模式频率值的降低与脂酰基链中的构象限制直接相关，这是由于gauche键数量的减少引起的。然后，Gen限制了DMPC疏水区的运动，从而减少了gauche键的数量。没有观察到Gen引起的vCH2带宽变化。为了获得有关DMPC酰基链亚甲基运动的更多信息，进行了1HT1NMR分析。对于空脂质体和载有Gen的脂质体，与DMPC亚甲基相关的1HFID信号回收率。DMPC亚甲基1个HT1值然后从在所描述的曲线计算DMPC和对应于1.839秒和2.883小号分别空脂质体和载有根。HATR-FTIR数据表明，DMPC1HT1值的56％的增加增强了DMPC疏水区域中Gen诱导的运动限制。NMR结果表明该限制也发生在快速运动中，例如旋转。
    　　 上Tm和DMPC疏水链的ΔH根效果也通过DSC评价。这些值是根据所示的吸热DSC曲线计算得出的，与空脂质体和Gen-loaded脂质体相关。Gen引起DMPC脂质体Tm值升高2.8°C。已知外部试剂可以促进脂质双层的结构变化，从而导致脂质的相变温度发生变化。整体分子包装的增加减小了两个系统相之间的熵差，导致典型Tm向更高的值转移。因此，观察到的Tm变化证实Gen改善了DMPC脂质体中的分子封装，与FTIR和NMR结果一致。在先前有关DPPC膜酰基链的研究中，Gen促进了与在DMPC脂质体中观察到的相反作用。Gen诱导的流化作用归因于DPPC疏水区中纱状构象异构体的增强。众所周知，胶结键的数量和类型决定了膜的构象顺序。随着脂质酰基链中碳原子数的增加，纽结构象体的数量增加。DPPC与DMPC的区别在于疏水链中的两个亚甲基，具有更多的扭结缺陷。DMPCHATR-FTIR数据显示，与Gen相互作用后，亚甲基gauche键的数量减少，这增强了该地区的vandeWalls力。因此，可能由Gen诱导的磷脂酰胆碱分子运动速率的影响受到脂蛋白构象构象异构体的数量的强烈影响，脂构蛋白构象异构体的数量取决于脂质疏水链的长度。DMPCΔH值的Gen促进变异也暗示了脂质酰基链中的分子重组至更受限的状态。空DMPC脂质体以及含有Gen的脂质体的ΔH值分别被检测为1.019J/g和1.482J/g。然后，由Gen促进的DMPCΔH增加等于0.463J/g，其对应于45.43％。ΔH的这种变化表明，根不深插入脂质双分子层。DMPC酰基链中Gen诱导的Tm和ΔH的离散变化增强了异黄酮在极性区域以及可能在疏水链的第一亚甲基中的优先位置。
    　　 为了获得有关Gen在DMPC脂质体中的整体影响的信息，进行了浊度分析。存在几种初始Gen浓度时的DMPC浊度曲线。观察到DMPC浊度的Gen浓度依赖性增加。在加入Gen的脂质体为3.6mg每毫升时，Gen负载的脂质体浓度为357.00uM，Gen促进了DMPC浊度增加55.67％。膜浊度值的增加可能反映了两种行为：1）脂质系统的团聚过程，导致粒径增加；2）由于由于脂质折光指数的改变，可以在液-凝胶相变中观察到脂质浊度的增加，这可能表明相重排至更有序的状态。因此，为了研究Gen引起的浊度值增加是否与可能的脂质体聚集有关，进行了DLS测量。从这些测定中，检测到与空的DMPC脂质体有关的331.00nm的直径。基因封装在脂质体中可将系统尺寸减小至278.50nm。对于空脂质体和Gen-loaded脂质体，多分散指数值分别对应于0.48和0.45。低于0.5的PDI值被认为具有良好的尺寸分布。由于Gen将DMPC脂质体的大小减小了52.50nm，因此表明异黄酮诱导的DMPC脂质体浊度的增加与团聚过程无关。然后，脂质体尺寸的减小可归因于非极性链之间的更大的内聚力，分子间的相互作用和分子包裹，如Gen诱导的那样。因此，浊度结果表明Gen-诱导的脂质体有序作用，这与通过HATR-FTIR，NMR和DSC技术观察到的Gen-加载的DMPC脂质体行为一致。对于不饱和膜，粒径减小与双键反式含量的增加有关。因此，有可能推断出，与Gen相互作用后，观察到的DMPC脂质体大小的减少可能与薄纱构象的减少有关。总之，尽管未观察到相态或取向的变化，Gen羟基与磷酸根和胆碱DMPC基团之间的偶极相互作用似乎是造成该脂质区域运动受限的原因。理论上，Gen羟基和脂质胆碱之间的偶极相互作用比磷酸盐更强，并且它可能会影响这一组中观察到的旋转速率限制，而不是在磷酸盐中。在亚甲基区域检测到Gen诱导的DMPC分子包装的增强，可能与gauche键数量的减少有关。DMPC分子包装的增加似乎反映了脂质浊度的提高以及脂质体尺寸的减小。由于存在薄纱柔顺剂，
    　　 通过DPPH方法评估了体外DMPC脂质体负载的Gen抗氧化活性，初始浓度为0.00至3.60mg每毫升。在相同的反应条件下将结果与游离形式的Gen活性进行比较。在反应条件下，游离形式和Gen负载脂质体均显示出浓度依赖性的还原电位。但是，载有Gen的脂质体作为抗氧化剂比自由Gen更为有效。在3.60mgmL的较高初始Gen浓度下，异黄酮显示70.32％的抗氧化活性，而其游离形式显示58.26％。与不包含5-OH的异黄酮相比。载有Gen的脂质体效率提高了12.06％，这可能是由于异黄酮对膜的作用，限制了极性和疏水区域的运动，导致自由基在系统中的扩散减少。Arora及其同事也提出了这种行为。另一方面，已知磷脂酰胆碱可能相互作用并引起DPPH自由基吸收的漂白，这表明脂质可以清除该自由基。磷脂的存在导致Buddlejaglobosa提取物的DPPH清除率增加，但不是以相加的方式。这可能与培养基中疏水性的增加有关，从而允许DPPH和Gen之间的相互作用。存在自由形式Gen，空DMPC脂质体和Gen加载脂质体的情况下大鼠神经胶质瘤细胞的计数。进行包含细胞和不含脂质体的培养基的对照实验。10uM，20uM和100uM的自由形式Gen分别减少了77％，89％和95％的细胞数。与CV计数相比，空DMPC脂质体使C6细胞数量减少了46％。Gen浓度为10和20uM的DMPC的细胞处理未显示细胞数量显着减少。但是，以100uM的浓度负载Gen的DMPC将C6细胞减少了79％。与自由形式的Gen相比，在相同浓度下，Gen100uM的Gen负载脂质体可促进C6细胞数量比第一个高出16％。
    　　 10uM，20uM和100uM的Free-Gen分别将细胞活力降低了88％，87％和86％。似乎在10uM时，free-Gen在细胞中达到了饱和效应。MTT减少数据显示CD组与CV组在统计学上不同，从而通过降低细胞生存力证实了DMPC的作用。空的DMPC脂质体使C6活力降低了近50％。在体外进行了测试，纯DMPC和混合DMPC脂质体对肿瘤细胞系生长的影响，并观察到对50％Raji细胞生长的抑制浓度具有相似的作用，证实了DMPC的抗肿瘤作用。基于磷脂酰胆碱的空脂质体可能诱导由皮肤微环境介导的与皮肤肿瘤相关的巨噬细胞功能和表型相关的凋亡效应。先前也有报道称磷脂酰胆碱可能在不同细胞系如结肠和血管内皮癌细胞中诱导凋亡。因此，磷脂酰胆碱可能影响与神经胶质瘤细胞有关的巨噬细胞。但是，需要进一步的研究来确认这一假设。与CV相比，用浓度为20和100uM的Gen负载脂质体进行的细胞处理分别显着降低了C6活力71％和83％。使用DMPC/Gen系统未观察到累加的抗肿瘤作用。实际上，Gen含量为20uM的Gen负载脂质体的效率比不含异黄酮的脂质体低16％。在较高浓度下，负载脂质体的Gen已达到其游离形式所描述的效果。与CD相比，这些Gen浓度分别使细胞活力降低了22％和34％。重要的是要注意，在睾丸细胞的Gen细胞毒性研究中，异黄酮具有浓度依赖性的双重作用。在本研究中使用的Gen浓度的情况下，浓度低于10ug/mL，异黄酮刺激细胞生长。仅在Gen浓度较高时才能达到生长和增殖细胞抑制作用。然而，星形胶质细胞活力测定未显示出在10uM，20uM和100uM的测试浓度下Gen的细胞毒性。
    　　 通常，低于100uM，细胞计数和MTT数据表明，游离形式的Gen对C6的作用比载有Gen的脂质体更有效。Gen诱导的DMPC分子顺序可能降低了异黄酮通过脂质体的扩散速率。这可能会降低体外的异黄酮C6细胞的可用性。但是，将100uM的Gen负载到脂质体中可能补偿了异黄酮的缓慢扩散，达到了Gen游离形式的效果。除此之外，还必须考虑到游离Gen在BBB中的生物利用度低，并且Gen掺入脂质体膜中可以使口服给药，摄入后增加肠道吸收和血清水平并促进活性物质进入血脂。BBB。因此，与CV相比，载有Gen的脂质体促进了C6细胞数量和活力的降低，这表明DMPC脂质体是控制Gen释放到脑部疾病的有趣系统。
    　　 在这项研究中，载有Gen的脂质体降低了极性和疏水脂质体区域的迁移率。Gen诱导的DMPC分子包装中的限制可能减少了DPPH自由基在脂质双层中的扩散，并促进了自由基与Gen之间的相互作用，从而增强了系统的抗氧化活性。确实，过氧化过程受反应物种扩散速率以及分布到亲水和疏水膜区域的影响。Gen在DMPC极性头和疏水链的第一个亚甲基处的位置，以及对系统分子运动的影响可能会增强或促进系统对DPPH氧化和其他降解反应的敏感性，从而延长其半衰期。有机体比更多的无序系统，例如基于asolectin的脂质体。同样，它可以防止与癌症过程相关的氧化应激。因此，在假设的体内测试中，Gen负载的DMPC抗氧化剂潜力可能非常有助于维持系统完整性，直到Gen释放为止，并有助于抗肿瘤活性。Gen是一种疏水性异黄酮，分子量为270.24道尔顿，可以穿过BBB并到达神经胶质瘤细胞，但利用率较低。考虑到体外抗神经胶质瘤测定，Gen在游离形式或脂质体负载下的效率似乎与浓度无关。含有20uM异黄酮的Gen脂质体系统对抗C6的效率低于其游离形式。Gen在DMPC膜中的表层位置以及异黄酮促进的脂质体增强范德华斯力可能已经阻碍了Gen载脂质体中异黄酮含量对体外的可用性C6细胞。同样，Gen羟基与DMPC胆碱和磷酸基团之间的偶极相互作用也可能降低了异黄酮C-5和C-7羟基的抗肿瘤作用。尽管DMPC空脂质体显示出显着的抗肿瘤作用，但Gen插入它们并没有促进针对C6细胞的累加活性，这可能证明了这一事实。
    　　 在100uM的剂量下，Gen负载的DMPCLUV比含异黄酮的大豆asolectinMLV的效率高45％，这可以弥补脂质体类型和组成在Gen对抗C6活力的功效中的作用。作为饱和磷脂，DMPC键通常显示出比大豆卵磷脂凝集素更高的反式构象。此外，Gen促进了DMPC分子运动的限制，水合度的降低和gauche键数的减少，有利于体系中反键构象的增加。集中于顺式-反式双键转化对药物递送脂质体分子特性影响的研究报告说，反式键构型数目在大小，稳定性以及抗肿瘤系统的包封和释放能力，提高其活性方面具有重要意义。的确，基于磷脂的系统中反式键构象增加与活性物质电位之间的协同策略被认为是一种创新的抗肿瘤策略。同样，重要的是要注意，DMPCLUV的尺寸比芦荟素MLV最小，Gen促进了DMPC脂质体在约50nm的尺寸减小。肿瘤毛细管的孔径在100至700nm之间。Gen将DMPC脂质体的尺寸减小至约280nm。较小的脂质体可增强通透性和保留效果，有利于被动靶向，并使其在肿瘤中蓄积。这些因素可以用来改善含DMPC的脂质体Gen系统的抗肿瘤作用，与大豆asolectin组合物相比。因此，在异黄酮浓度等于或高于100uM的情况下，脂质体负载的Gen似乎与Gen自由形式降低C6细胞生存力一样有效，并且可能是越过更稳定的系统，有望成为一种有效的药物用于神经胶质瘤治疗的抗肿瘤药物递送系统。
 
出国看病概况

海外医疗在国外发展较为成熟，比如在欧美等医疗技术发达国家，很多医院都设有国际病人办公室并配备多语种医学专业翻译人员，就医流程和模式都已相对成熟。在国内，海外医疗虽然还属于新兴行业，但发展势头迅猛，发展潜力巨大，市场前景广阔。
　　 从中国经济发展水平和消费能力预测，未来10年时间，海外医疗市场及其相关产业的市场的巨大潜力，有可能超过数百亿美元。
出国看病适应症
靶向药物
 

  • 联系出国看病服务机构网

  • 电话：13263277712
    北京办公室地址：北京市丰台区万丰路

出国看病服务机构网 版权所有 2012-2022 日本房产 海外医疗 BNCT 网站优化 卡马替尼 索托拉西布