出国看病
 
胶质母细胞瘤细胞中信号传导导致肿瘤进展
  • 　　胶质母细胞瘤是中枢神经系统中最常见和致命的恶性肿瘤。它具有强大的侵略性，使细胞容易侵入周围的正常脑组织。然而，由于可能会刺激剩余的肿瘤细胞增殖并侵入正常的脑组织以形成转移的肿瘤，因此外科手术后的临床治疗无法完全去除肿瘤组织。尽管神经外科技术以及化学疗法，放射疗法和生物疗法相结合的治疗已大大改善，但GBM患者的生存时间仅为12-15个月。因此，迫切需要探索GBM的性质及其潜在的分子机制，以更好地了解其恶性程度，从而开发出一种新的GBM治疗方法。表观遗传调节剂在GBM进展中起重要作用。MYST1也称为KAT8，MOZ，YBF2，SAS2，MOF，或者TIP60蛋白1，是一种属于MYST家庭组蛋白乙酰化的酶和包含染色质，锌指基序，和一个HAT域。作为催化亚基，MYST1形成两个不同的多蛋白复合物，MSL和NSL，其乙酰化H4K16以及H4K5和H4K8。已经证明MYST1在胚胎形成和发育，染色质组装，转录激活，细胞凋亡，双链断裂修复和细胞应激反应中起重要作用。
    　　 有趣的是，MYST1还显示出了发展肿瘤的能力。在髓母细胞瘤，例原发性乳腺癌，例卵巢上皮癌，例大肠癌，胃癌和肾细胞癌中，MYST1下调，而在非小细胞肺癌中则上调。MYST1在K588处使Nrf2乙酰化，并将其保留在细胞核中，从而调节与抗氧化相关的基因并调节人非小细胞肺癌的抗药物反应。MYST1使组蛋白脱甲基酶LSD1乙酰化，以阻止其与上皮基因启动子的结合和组蛋白脱甲基化，从而抑制上皮-间质转化和肿瘤浸润。此外，MYST1被G9a-二甲基化的ERαK235募集到ERα目标基因启动子以乙酰化H4K16，从而促进乳腺癌中的基因转录。然而，从未探索过MYST1与GBM的相关性。在这项研究中，出国看病服务机构表明MYST1在GBM中过表达，并预示不良预后。此外，发现抑制MYST1会阻止表皮生长因子受体信号传导并诱导细胞周期停滞在G2M期。
    　　 人类GBM细胞系保存在Dulbecco改良的Eagle培养基或Dulbecco改良的Eagle培养基：营养混合物F-12U87，U251和U118细胞系补充了10％的胎牛血清和1％的青霉素-链霉素。HEB神经胶质细胞也在含有10％FBS和1％P/S的DMEM中培养。利用由医院神经外科提供的神经胶质瘤组织获得原代神经胶质瘤细胞。这些细胞也在含有10％FBS和1％P/S的DMEM中培养。将293FT细胞系保留在补充有10％FBS的DMEM中，L-谷氨酰胺和1mmol/L丙酮酸钠。获得了胸苷类似物5-溴-2-脱氧尿苷，二甲基亚砜和3--2,5-二苯基-2-H-溴化四唑来自Sigma-Aldrich。厄洛替尼从MedChemExpress购买。设计并合成了RNAi靶位点，并将其克隆到慢病毒pLKO.1载体中。使用PCR获得了人类全长MYST1cDNA，并将其克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体中。如前所述，使用了病毒载体的构建，转染和感染。
    　　 根据制造商的规程，使用RNAisoPlus提取总RNA，并如先前报道的进行实时定量PCR。是凭借ΔΔ的进行表达分析方法与甘油醛-3-磷酸脱氢酶作为对照。引物是根据先前的研究设计的。如先前所述进行蛋白质印迹。根据先前的描述进行BrdU测定。在该实验中，使用了26种BrdU抗体和山羊抗兔IgG交叉吸附ReadyProbes二抗，AlexaFluor594实验。进行MTT测定。台盼蓝测定的简要说明如下：2×105细胞接种在六孔板上，并在指定的时间后用胰蛋白酶消化细胞，并用等体积的台盼蓝充分反应，然后将活细胞进行不蓝染在显微镜下计算。根据先前的报告进行细胞周期的检测。借助于先前提供的方法，通过软琼脂测定法对LN229和U87细胞测定集落形成能力。购买了四周大的雌性小鼠，并关在无病原体的房间里。将在无FBS的100μLDMEM中具有基因改变的LN229和U87细胞皮下注射到小鼠的两只腹侧。每组包含4-6只小鼠。肿瘤饱满后每四天通过卡尺测量来测量肿瘤的生长，并通过以下公式计算肿瘤体积。48-52天后，切除肿瘤并称重。所有动物实验均根据赫尔辛基宣言进行，并得到动物护理和使用委员会以及蚕桑与系统生物学研究所的动物实验和使用委员会的事先批准和监督。
    　　 进行免疫细胞化学。在本实验中，使用了MYST1和Ki67抗体，HistostainSP试剂盒。将细胞铺在96孔板中，并使用人EGFQuantikineELISA试剂盒进行酶联免疫吸附测定以检测培养基中的EGF水平。所有数据分析均使用软件GraphPadPrism8进行。两组之间使用未配对的两尾学生t检验进行统计分析。P小于.05被认为具有统计学意义获得并在基因表达谱交互分析GBM和正常组织中MYST1mRNA表达的癌症基因组图谱数据。来自数据库的MYST1mRNA表达数据称为肿瘤胶质瘤Gleize‐30‐MAS5.0‐u133p2，来自数据库的预后数据称为肿瘤胶质瘤‐IGS不同亚型的MYST1表达数据以及MYST1与EGFR，AKT1和MAPK3共表达的数据。进行对数秩检验以求生存分析的重要性。扫描截断方式用于在KaplanMeier模块中获得最显着的表达截断，用于生存分析。MYST1mRNA在原发性和复发性GBM中的表达数据以及存活率，以及MYST1mRNA水平与EGF，TGFA，AREG和EREG获取上皮调节蛋白mRNA水平。从神经胶质瘤基因组图谱。对不同神经胶质瘤亚组的MYST1基因表达模式进行单因素方差分析多重比较。使用芯片抗体H4K16ac或H4K16ac人成纤维细胞IMR90细胞中H4K16ac的ChIP-seq数据可从GEO，并使用集成基因组查看器2.6.3版进行了分析。
    　　 为了揭示MYST1的功能，首先从GEPIA下载的TCGA数据库中探索了它在GBM和正常组织中的表达。结果显示，与正常脑组织相比，MYST1mRNA表达在GBM中高度表达。由于CIC突变预测胶质瘤患者的预后不良，在与数据库中的称为肿瘤胶质瘤格莱兹-30-MAS5.0-u133p2CIC野生型或突变胶质瘤分析MYST1表达。结果显示，具有CIC突变的神经胶质瘤中的MYST1表达高于具有CIC野生型的神经胶质瘤中的MYST1表达。此外，MYST1还增加了其在复发性GBM中的表达。qRT-PCR和蛋白质印迹显示，MYST1mRNA和蛋白质表达在较高等级的神经胶质瘤中有所增加。由于DNA的甲基化会影响基因的表达，因此进一步发现，在WHO较高级别的神经胶质瘤中，MYST1甲基化水平低于CGGA数据表中较低级别的神经胶质瘤。两个数据库中分析了MYST1表达与神经胶质瘤患者预后的关系。huex10p借助Kaplan-Meier分析。结果显示，在两个数据库中，MYST1表达与95例脑胶质瘤患者的总生存率呈负相关。此外，MYST1表达升高的患者3年或5年OS率也高于MYST1表达降低的患者。在来自GlioVis的称为重要GBM数据的GBM数据库中，MYST1的高表达也预示了不良的预后。在CGGA数据库中的WHOII级队列中，还发现MYST1表达与预后呈负相关。此外，根据CGGA中神经胶质瘤基因甲基化数据库的数据，MYST1基因甲基化水平与神经胶质瘤患者的预后呈正相关。这些结果表明MYST1在GBM中高表达，并预测GBM患者的预后不良。
    　　 分析了几种GBM细胞系中的MYST1mRNA和蛋白质表达。结果表明，MYST1通常在这些细胞系中表达。由于MYST1在LN229，U87和A172细胞中的表达较高，因此在以后的研究中使用了它们。为了进一步阐明MYST1在GBM细胞中的功能，出国看病服务机构使用慢病毒介导的shRNA稳定转染沉默了LN229，U87和A172细胞中MYST1mRNA和蛋白的表达。值得注意的是，与无活性绿色荧光蛋白沉默相比，MYST1沉默降低了三种细胞系的细胞活力和细胞数量。此外，MYST1沉默还减少了这些细胞中BrdU的掺入。结果表明MYST1沉默抑制了GBM细胞中的细胞增殖。为了进一步解释这些结果，出国看病服务机构在名为TumorGlioma-IGSFrench-95-rma_sketch-huex10p的队列中分析了与MYST1表达相关的基因。小型本体分析表明基因参与了生物过程，包括细胞周期，膜，DNA修复和激酶与神经胶质瘤中MYST1的表达显着相关。由于细胞周期是最重要的生物学过程，因此将随后的研究集中在这一主题上。碘化丙啶染色的流式细胞仪分析表明，与无活性的GFP沉默相比，MYST1沉默诱导LN229，U87和A172细胞在G2M期细胞周期停滞。此外，发现MYST1敲低后CDK1，CyclinA和CyclinB1等细胞周期相关蛋白的表达显着降低，而MYST1敲低后CDK抑制剂p21的表达则显着上调。这些结果表明，MYST1沉默可能通过调节细胞周期进程来抑制细胞增殖。
    　　 出国看病服务机构证实了MYST1沉默在体内GBM细胞中的作用。在此之前首先通过软琼脂实验测试了MYST1沉默后细胞的自我更新能力。与GFP沉默相比，MYST1沉默减少了LN229和U87细胞中集落形成的大小和数量。根据上面获得的结果，尝试通过在-nu的侧面皮下注射LN229-shGFP，LN229-shMYST1，U87-shGFP和U87-shMYST1细胞来探索MYST1在体内肿瘤进展中的作用。裸鼠中所有MYST1沉默的肿瘤的肿瘤体积和重量在48-52天后分别显着小于对照组。苏木精-伊红染色显示，MYST1敲低后，恶性肿瘤降低。免疫染色分析进一步证实了沉默MYST1的细胞中MYST1和Ki67蛋白的下调。综上所述，这些结果表明MTST1对于体内GBM细胞的致癌性至关重要。
    　　 GBM的遗传改变先前已被发现，并经常扩增某些受体酪氨酸激酶，例如EGFR，血小板衍生的生长因子受体α和Met原癌基因。其中EGFR被发现在约57％的GBM被扩增并且是用于GBM窝藏EGFR活化临床目标。在GBM的间质亚型中，EGFR的扩增水平低于其他三种亚型，例如经典，神经和前神经亚型。发现在GBM的间质亚型中MYST1表达也比其他三种类型低。重要的是，发现TCGA队列名为TumorGBMTCGA‐540‐MAS5.0‐u133a的MYST1表达与EGFR及其下游靶标）的表达显着相关。此外与GFP沉默相比，MYST1沉默后3个GBM细胞系中EGFR的Tyr1068，AKT的Ser473和Erk1/2的Thr202/Tyr204的磷酸化下降，而GFP沉默表明，MYST1下调了EGFR‐AKT‐ERK1/2信号通路击倒。EGFR-AKT-ERK1/2信号途径被下调在上述MYST1沉默后得到的异种移植物，用GFP沉默。但是，MYST1沉默后，EGFRmRNA表达保持不变。这些结果表明MYST1可能促进GBM中的EGFR信号通路。
    　　 为了进一步证实以上结果，出国看病服务机构在LN229和U87细胞中过表达MYST1。结果表明与GFP过表达的组相比，使用MTT方法在体外用MYST1促进了EGFR信号通路和细胞增殖激活，因此首先从GlioVis的数据表中分析了MYST1mRNA水平与这些配体水平的相关性。仅EGF表达与MYST1表达正相关）。然后进行ELISA分析，以检测MYST1沉默或过表达后LN229和U87细胞培养基中的EGF蛋白水平。结果显示，MYST1沉默后EGF蛋白水平降低，而MYST1过表达后EGF蛋白水平升高。与以上结果一致，MYST1沉默后，LN229和U87细胞中EGF的mRNA水平也下调，而MYST1过表达后EGF的mRNA水平也上调。出国看病服务机构怀疑MYST1控制的H4K16乙酰化可能在EGF的表达中起作用。蛋白质印迹显示，MYST1沉默后，LN229和U87细胞中H4K16乙酰化水平降低，而MYST1过表达后H4K16乙酰化水平升高。重要的是，使用从GEO下载的ChIP级H4K16ac抗体在人成纤维细胞IMR90细胞中H4K16ac的ChIP-seq数据也显示H4K16ac富含EGF基因的DNA序列。这些结果暗示MYST1可能通过表观遗传促进EGF的转录激活EGFR信号传导。
    　　 越来越多的证据表明，MYST1与各种癌细胞类型的进展相关，包括髓母细胞瘤，乳腺癌，卵巢癌，结直肠癌，胃癌，肾细胞癌和NSCLC。在这里，描述在GBMMYST1表达的功能意义。胶质母细胞瘤是脑中最恶性的肿瘤，预后很差。尽管已经进行了许多努力来治疗GBM，但是对其治愈几乎没有效果。因此，迫切需要对这种疾病有更好的了解，并制定出更有效的治疗方案。作为ErbB家族的酪氨酸激酶受体，EGFR是一种170kDa糖蛋白，具有细胞内，细胞外和跨膜结构域。分子分析表明，大约一半的GBM具有EGFR扩增，过表达或EGFRvIII突变。EGFR赋予各种在GBM恶性影响，包括促进肿瘤生长，细胞运动性和侵袭，辐射和化疗耐药，维护异质性，EGFR可以通过它们的细胞内结构域，自磷酸化被激活，其随后激活PI3K/Akt和MEK信号通路。由Ras介导的MAPK激活刺激了EGFRTyr1068的磷酸化。理所当然的是，EGFR靶向治疗理论上是有前途的抗GBM治疗。但是，该疗法的临床疗效仅在GBM患者中适中。因此，对EGFR激活机制的更好理解可能为以EGFR为靶点的GBM治疗提供线索。
    　　 在研究中发现TGGA临床队列中EGFR及其下游效应子Akt和Erk1/2的表达与MYST1表达呈正相关。此外，MYST1沉默可灭活EGFR信号通路，而MYST1过表达则可在体内和体外激活EGFR信号通路。这些结果预测了MYST1在GBM中的潜在作用。KM分析显示，MYST1高表达与神经胶质瘤和GBM患者的不良预后显着相关。此外，几种GBM细胞系中的MYST1沉默显着阻碍细胞增殖，而MYST1的过表达促进体外细胞增殖。MYST1下调或上调在裸鼠中也起着重要的作用在致瘤性。所有数据表明，MYST1在GBM的发展中起着重要作用。厄洛替尼是EGFR的一种特异性抑制剂，已获得美国食品和药物管理局的批准用于NSCLC的治疗。与单纯化疗相比，厄洛替尼联合化疗可使NSCLC患者的OS改善19％，无进展生存期改善29％。此外，FDA于2005年11月批准了厄洛替尼联合吉西他滨用于治疗胰腺癌。在肺癌中，厄洛替尼已被证明对有或无EGFR突变的患者有效，但似乎对患者更有效EGFR突变，单独使用或与常规的佐剂疗法组合埃罗替尼已经未示出以表示用于GBM治疗的主要成就。Try1068磷酸化的EGFR也被证明是厄洛替尼的靶标。在研究中使用厄洛替尼阻断EGFR，EGFR阻断后，挽救了MYST1过度表达促进的细胞增殖和EGFR活化。结果表明，MYST1通过激活GBM中的EGFR促进了肿瘤的进展。了解功能可能为GBM中的EGFR靶标治疗提供线索。在MYST1沉默或过表达后，EGFRmRNA的表达保持不变。然后证明MYST1可能在表观遗传上控制EGFR配体EGF的转录。这些结果意味着MYST1可能通过促进EGF的表达来控制EGFR信号传导。
    　　 出国看病服务机构分析了一组神经胶质瘤中与MYST1表达相关的基因，微型本体分析表明，细胞周期是MYST1可能涉及的最相关的生物学过程。此外，发现MYST1沉默诱导了G2/M期的细胞周期停滞以及细胞周期相关蛋白的减少以及GBM细胞中p21的上调。在雄激素受体转化的PC3前列腺癌中，MYST1耗竭还诱导p21上调，从而导致G2M停滞。MYST1/MOF可直接结合并维持增殖细胞中细胞周期进程所需基因的表达。在微型本体分析中，DNA修复可能是导致G2M阶段停滞的原因，是第三大相关的生物学过程。许多研究还表明，MYST1/MOF在应对DNA损伤中起关键作用。此外，EGFR-AKT/ERK信号传导途径在GBMG2M期的主要调节剂。MYST1沉默导致EGFR-AKT/ERK信号转导通路下调可能也是G2/M期停滞的原因。但是，还需要做更多的工作来进一步解释MYST1在GBM中的功能。
    　　 总之，MYST1表达与神经胶质瘤患者的3年或5年生存率呈负相关。结果表明，GBM细胞中的MYST1沉默可在体外阻止细胞增殖和细胞周期进程，并在体内抑制肿瘤形成。此外，MYST1的过表达促进了体内外肿瘤的发展。EGFR信号通路被MYST1激活，而被MYST1沉默抑制。EGFR抑制剂厄洛替尼可恢复MYST1过表达诱导的细胞增殖。MYST1可能通过表观遗传促进EGFR配体EGF的表达来控制EGFR信号传导。数据显示，MYST1在调节GBM中肿瘤进展中起关键作用，并可能为GBM治疗提供线索。
 
出国看病概况

海外医疗在国外发展较为成熟，比如在欧美等医疗技术发达国家，很多医院都设有国际病人办公室并配备多语种医学专业翻译人员，就医流程和模式都已相对成熟。在国内，海外医疗虽然还属于新兴行业，但发展势头迅猛，发展潜力巨大，市场前景广阔。
　　 从中国经济发展水平和消费能力预测，未来10年时间，海外医疗市场及其相关产业的市场的巨大潜力，有可能超过数百亿美元。
出国看病适应症
靶向药物
 

  • 联系出国看病服务机构网

  • 电话：13263277712
    北京办公室地址：北京市丰台区万丰路

出国看病服务机构网 版权所有 2012-2022 日本房产 海外医疗 BNCT 网站优化 卡马替尼 索托拉西布