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TNF-a在脊索瘤进展和炎症通路中的作用
  • 　　脊索瘤是轴向骨骼中出现的主要骨肿瘤。他们的发病率约为百万分之一。这些罕见的肿瘤对化疗和放疗高抗，到目前为止，还没有成功的，非手术疗法可用。根治性放疗和放射治疗是治疗的首选。总体而言，5年，10年和20年生存率分别为68％，40％和13％。尽管脊索瘤生长缓慢，但它们往往是局部侵入性的，并且在手术后表现出很高的复发率。在早期阶段，脊索瘤是非转移性的，但在疾病过程中，它们倾向于转移。高达60％的患者发展为肺，骨，软组织，淋巴结，肝脏或皮肤的远处转移。转移是一个预后因素，但该疾病的进展的分子基础仍不清楚。
    　　相当一部分出国看病监控的癌症相关的环境因素，如慢性感染，吸烟，吸入石棉和肥胖，都与炎症有关，肿瘤促炎症正在成为癌症的标志。通过使用的效应分子，肿瘤浸润性炎性细胞可以诱导血管生成，癌症细胞增殖，组织侵袭转移性传播和播种。到目前为止，只有少数研究报道了脊索瘤中肿瘤浸润淋巴细胞的存在。在最近的一项研究中，发现PD-L1在脊索瘤中高度表达，同时存在肿瘤浸润淋巴细胞。在同一项研究中，发现肿瘤浸润淋巴细胞的存在与脊索瘤转移的发生有关。据报道，脊索瘤细胞可能高度表达表皮生长因子受体。
    　　肿瘤坏死因子-a（TNF-a）是一种细胞因子，主要由白细胞，特别是巨噬细胞分泌。虽然该名称暗示了坏死或凋亡效应，但它也可以促进癌细胞的存活，运动和侵袭。已经发现TNF-a与肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）的结合激活NF-κB途径，最终导致抗凋亡活性。已知TNF-a在炎症，免疫和癌症进展中起重要作用。在卵巢癌中，已经发现由癌细胞内在产生的TNF-a可以增加细胞增殖和肿瘤进展。肾细胞癌的体外研究表明，TNF-a可诱导上皮至间质转化（EMT）。在卵巢癌和乳腺癌，TNF-a处理已发现增加CD44的水平，这是癌症干细胞标记物。用TNF-a长期治疗MCF-7乳腺癌细胞之前已被用于产生表现出增加的化学抗性和EMT的TNF-a抗性细胞系。白血病抑制因子（LIF）是一种与LIF受体（LIFR）结合的细胞因子，通过这种方式激活几种信号通路，包括JAK/STAT3，PI3K/AKT，ERK1/2和mTOR信号通路。以前，我们发现LIF可能对脊索瘤有促进肿瘤的作用。PD-L1是一种跨膜蛋白，在几种癌症中表达，包括黑素瘤，肺癌，乳腺癌，卵巢癌，胰腺癌，食道癌，肾癌，膀胱癌和造血系统癌症。PD-1/PD-L1的相互作用抑制T细胞的刺激，存活和效应器功能，并导致肿瘤特异性T细胞的细胞凋亡，使肿瘤细胞从免疫攻击。另外的研究已经揭示LIF，PD-L1，TNF-a和相关分子之间的潜在合作这又可以诱导肿瘤促进炎症在癌症。
    　　在本研究中，我们旨在评估TNF-a对体外脊索瘤细胞的功能影响，并研究TNF-a表达水平与临床病理特征之间的相关性。U-CH1和MUG-Chor1细胞系，可从ATCC生物资源中心获得，由Chordoma基金会（美国北卡罗来纳州达勒姆）提供。将细胞在0.1％明胶包被的组织培养板上培养，并保持在IMDM/RPMI培养基，比例为4：1，含有10％胎牛血清和1％抗生素。在整个文本中此点之后，该介质将被称为培养基（CM）。常规进行常规流式细胞术和基因表达分析相关分子标记，基于聚合酶链反应（PCR）的支原体筛选和Sanger测序短串联重复以验证原始细胞系的特征。将10ng/ml人重组TNF-a给予细胞1,4或7天。为了获得长期TNF-a处理的细胞系，通过逐渐增加每2个月2.5和5至10ng/ml的TNF-a浓度，将TNF-a给予U-CH1和MUG-Chor1细胞12个月。。此后，细胞系在含有10ng/mlTNF-a的CM中生长。将NF-κB抑制剂QNZ乙基以TNF-a作为TNF给予细胞。+QNZ控制长期治疗。为了确定延长的TNF-a处理的永久效应，在TNF-a暴露6个月后，U-CH1和MUG-Chor1细胞被剥夺TNF-a。通过这样做，建立另一个对照组并标记为“TNF-a剥夺组”。LIF和TNF-a在脊索瘤细胞中的关系和相互作用通过用100ng/ml重组人白血病抑制因子在CM中每周两次处理细胞来评估，持续3周。。
    　　洗涤胰蛋白酶消化的细胞并重悬于含有人FcR阻断试剂的磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。首先将细胞在冰上孵育5分钟，然后与缀合有PerCP-Cy5.5的抗CD338抗体孵育30分钟，然后用PBS消除未结合的抗体。两组均用DAPI染色以排除死细胞。为了使NF-κB分子的行为可视化，用4％多聚甲醛固定在明胶包被的盖玻片上生长的细胞，用1％BSA封闭并与初级抗NF-kBp65抗体孵育过夜。所有洗涤均用含有1.5％吐温的PBS进行。AlexaFluor488标记的山羊抗兔IgG用作第二抗体并孵育1小时。使用DAPI进行核染色，并在荧光显微镜下观察细胞。
    　　使用具有8.0μm孔径的Transwell膜插入物来评估TNF-a处理的细胞的侵袭和迁移的变化。为了评估侵袭，将测定室用250μg/ml基底Matrigel包被，并在37℃温育过夜。接下来，4×104将细胞转移到含有TNF-a的无血清CM的上室中。向下室提供含有10％胎牛血清的1mlCM。为了分析TNF-a暴露的短期影响，将U-CH1和MUG-Chor1细胞接种于无血清完全培养基，无血清完全培养基+TNFa和无血清完全培养基+TNFa+QNZ中，并孵育持续24小时。将插入物用3.7％甲醛固定，用甲醇透化并用结晶紫染色。使细胞可视化并在倒置光学显微镜下以400倍放大倍数在四个不同视野中计数。
    为了评估长期TNF-a处理的细胞的自我更新，进行了集落形成测定。为此，将6孔板用1mlCM和1％低熔点琼脂糖包被，并在37℃下孵育以固化。接下来，添加含有0.7％低熔点琼脂糖的完全培养基中的细胞的顶层。每3天补充一次培养基。3周后，将平板用0.05％结晶紫染色，并在倒置光学显微镜下计数含有超过20个细胞的菌落。
    　　将长期TNF-a处理的细胞（4×105）接种在含有2％琼脂糖和0.9％NaCl的25-cm2培养瓶中，培养基中含有1％抗生素的CM（无血清），50ng/ml人FGF-2，50ng/mlEGF，1×N2补充物和1×B27补充剂。细胞簇通常用血清移液管分散。4周后，将球状体转移到96孔板中，在光学显微镜下定量肿瘤球的总数。
    　　为了评估TNF-a对化学抗性的影响，将细胞接种于24孔板中，每个实验组一式两份。检查几种化学治疗剂以确定它们对脊索瘤细胞的细胞毒性。紫杉醇和硼替佐米的细胞毒性最高（数据未显示）。用完全CM中新鲜制备的0.016μM紫杉醇和0.016μM硼替佐米处理细胞，每2天更新一次。活力测定在7天内进行。
    　　在Yeditepe大学医院神经外科手术期间获得了二十四个人脊索瘤样本。没有患者接受过化疗。用于基因表达定量的样品在手术后立即在-80℃冷冻。另外，保留石蜡包埋的脊索瘤组织用于免疫组织化学（IHC）染色。回顾性收集临床病理资料，包括年龄，性别，肿瘤位置，诊断，肿瘤起源，手术切缘，肿瘤体积，复发，转移及辅助治疗。在手术前测定患者血清样品中的中性粒细胞/淋巴细胞比率（N/L）。随访时间定义为手术与死亡或最后一次接触患者之间所经过的时间。只有病理学定义为脊索瘤的样本才被纳入研究。患者信息不足或随访时间<3个月的样本被排除在研究之外。
    使用研钵和研杵将新鲜冷冻的初级clival脊索瘤组织样品在液氮中匀浆，然后根据制造商的方案立即加入TRIzol。还从体外TNF-a处理的细胞，LIF处理的细胞和它们各自的对照中分离总RNA。使用NanoPhotometer定量RNA。使用TaqManGeneExpressionAssays通过两步实时PCR定量mRNA水平。以GAPDH作为内部对照并通过将值归一化至对照组的那些来确定相对mRNA水平。
    　　使用RIPA缓冲液提取总蛋白质。使用PierceTMBCA蛋白质测定试剂盒定量蛋白质浓度。将蛋白质样品以20μg/泳道的浓度加载到12％聚丙烯酰胺凝胶上，并在电泳后转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。用含有5％脱脂奶粉的TBS/Tween封闭膜1小时，随后在4℃下用抗T（Brachyury）一抗孵育过夜。接下来，将膜用TBS/Tween洗涤三次，并与HRP缀合的二抗一起温育。GAPDH用作内部阳性对照。使用FusionPulse拍摄图像。
    　　使用抗TNF-a和抗TNF受体1抗体以盲法方式进行石蜡包埋的脊索瘤组织的IHC分析。病理学家对患者的临床特征不了解。还进行了独立审查。组织癌区域中的细胞评分如下：（0）否，（1）低，（2），中度或（3），高表达。对于抗TNF受体1评分仅考虑膜染色强度，而对于抗TNF-a评分考虑膜和细胞质染色强度。通过对评分细胞的加权平均和它们在组织中占据的面积百分比计算每个患者的平均细胞强度评分。
    　　使用单向ANOVA分析基于微阵列的表达数据。分析患者的年龄，性别，肿瘤部位，复发，转移和生存状态的临床病理特征，并与TNF-a和TNFR1表达水平，IHC评分和N/L比值进行相关性分析。使用Spearman等级相关性测试评估相关性。使用Mantel-Cox（对数秩）测试制备总体存活图，其类似于Kaplan-Meier存活分析方法。所有其他p值是使用双尾Studentt检验获得的，该试验至少一式三份进行。一个p值<0.05表示统计学显着性。根据相对中位数将具有高和低TNF-a和TNFR1表达水平和N/L比率的患者分成相等数量的组。除非文中另有说明，否则每个实验一式三份进行。对每个实验评估显着的异常值并从分析中排除。
    　　我们发现在TNF-a处理后，U-CH1和MUG-Chor1细胞系均表现出向更具间充质状态的变化形态，细胞间空间增加和纺锤状细胞结构形成，这表明EMT的发生。这些细胞。我们还发现短期TNF-a处理对这些细胞的增殖没有影响（数据未显示）。荧光显微镜分析显示U-CH1和MUG-Chor1细胞表达NF-κB，并且与对照细胞相比，TNF-a暴露后其丰度显着增加。此外，我们发现NF-kB抑制剂QNZ降低了TNF-a暴露的作用。在TNF-a处理的样品中，在第1天和第7天都观察到NF-kB在细胞核中的清晰定位，而长期TNF-a剥夺不会引起NF-kB定位或丰度的任何变化。
    　　使用Transwell检测，我们发现TNF-a治疗在短期和长期治疗之后显着增加了两种脊索瘤细胞系的迁移和侵袭，如长期的代表性图像所示。经过处理的样品。我们还发现QNZ减少了细胞的侵袭和迁移，并且长期TNF-a剥夺不会引起细胞侵袭和迁移的任何显着变化。
    　　在暴露于TNF-a后，在U-CH1和MUG-Chor1细胞中测定TNF-a对EMT标记基因表达水平的影响。使用qRT-PCR评估EMT标志物E-钙粘蛋白，CK19，EMA，Twist，Slug，Snail，波形蛋白，Zeb1，Zeb2和N-钙粘蛋白的表达。通过这样做，观察到上皮标志物E-钙粘蛋白，CK19和EMA的显着抑制，而晚期间充质标记物ZEB2。被上调了。随后的QNZ治疗降低了TNF-a的作用，但在大多数情况下未能中和对照细胞的水平。我们还发现Brachyury（T）基因表达水平被长期TNF-a处理抑制，并且QNZ处理显着增加T表达水平，尽管没有完全拯救。在短期治疗样本中，CK19和E-钙粘蛋白被发现被抑制，而EMT标记Vimentin，Slug，Twist和N-cadherin在第1天已经被上调。在T中未观察到显着变化。第1天我们发现，与对照细胞相比，E-cadherin，CK19和T表达水平在第4天降低，而ZEB2表达水平升高。QNZ处理对TNF-a处理产生相反或中和作用。使用Western印迹，我们发现brachyury蛋白表达数据大多与mRNA表达数据一致。与对照细胞相比，发现MUG-Chor1细胞中的T蛋白水平降低。我们还发现TNF-a处理后U-CH1细胞中T蛋白水平降低。有趣的是，我们没有在TNF-a剥夺的MUG-Chor1细胞中检测到任何T蛋白。
    　　我们发现长期TNF-a处理增加了软琼脂中U-CH1和MUG-Chor1细胞的集落形成能力。对长期TNF-a处理的脊索瘤细胞施用QNZ降低了它们的集落形成能力。在非粘附条件下，我们发现TNF-a处理增加了脊索瘤细胞中的肿瘤球形成，并且与对照组相比，长期TNF-a处理组中的肿瘤球形成显着增加。我们还发现，与对照细胞相比，长期TNF-a处理的细胞对紫杉醇和硼替佐米的化学抗性显着增加。随后的QNZ处理降低了这些细胞的化学抗性。药物转运蛋白CD338（ABCG2）水平的伴随变化证实了我们的发现，这表明长期TNF-a处理将脊索瘤细胞转变为更加化疗抗性的状态。由于TNF-a对生存力的潜在早期作用，因此不在短期治疗组中进行这些测定。
    　　基于微阵列的表达数据显示，与对照组相比，在长期TNF-a处理的样品中702个基因被上调并且539个基因被下调。此外，我们发现在用TNF-a处理的样品中，351个基因被上调，200个基因被下调一周。随后的KEGG途径富集分析揭示了长期和短期治疗组中促炎途径的富集。与炎症和转移相关的基因网络和基因，如Toll样受体信号，TNF-a，NF-kB和细胞粘附分子被发现受到影响，一些基因在TNF-一周后被上调a治疗。在长期TNF-a处理的样品中，发现关键途径和诸如Ras和PI3K-AKT信号传导途径，HIF-1和CAM的因子被解除调节。
    　　Ingenuity途径分析显示TNF-a作用于广泛的肿瘤进展重要基因。在用TNF-a治疗一周的经典途径中，包括肿瘤坏死因子受体2（TNFR2）信号传导，巨噬细胞活化，NF-kB信号传导，Toll样受体信号传导和IL-10信号传导途径被发现是影响。发现TNF-a，IL1B，NF-kB复合物，RelA和TGFB1在通过分析鉴定的最上游调节基因中发挥作用。与这些炎症反应相关的显着病症是癌症和炎性疾病。细胞存活，运动和增殖也是分析确定的最重要特征之一。
    　　在长期处理的样品中，除TNF-a下游和炎症途径外，还发现促血管生成途径受到影响。这些分析中的顶部上游调节剂是TGFB1，TNF，IL1B，ERBB2和Wnt3a。值得注意的是，这些途径也与癌症和炎性疾病有关。在这些样品中受影响的顶级分子功能是细胞运动，发育，生长和增殖，以及细胞-细胞相互作用和细胞组装。
    　　为进一步分析，研究了显示高度一致的基因调控的网络。对于短期TNF-a处理的样品，产生三个网络。解释了如何解释数字。包括与升高的炎症反应相关的基因，其具有诸如抗原呈递细胞的活化，吞噬细胞的骨髓细胞募集和细胞免疫应答的功能。集中于涉及细胞运动，迁移和侵袭以及白细胞浸润的升高的途径。侧重于巨噬细胞募集。为了研究长期TNF-a治疗的效果，设计的重点是参与肿瘤细胞侵袭和内皮细胞分支的升级基因相互作用，这可能模拟发生血管内渗出或外渗的晚期转移过程。集中于癌症中的细胞运动，并且所涉及的基因先前已经与乳腺癌细胞运动相关的途径相关联。补充图3G侧重于VEGFA下游途径，其导致血管形成和成纤维细胞动员。
    　　所讨论的基于微阵列的表达数据保存在NCBIGeneExpressionOmnibus中，可通过GEO系列登录号GSE101866获取。用于长期TNF-a治疗的早期TNF-a治疗和GSE101867。
    　　为了确定TNF-a处理是否影响脊索瘤细胞中细胞因子LIF的表达（反之亦然），我们使用qRT-PCR。在这样做时，我们发现与未处理的那些相比，用LIF处理3周的U-CH1和MUG-Chor1细胞显示出TNF和TNFR1水平增加。有趣的是，我们发现与对照细胞相比，长期TNF-a处理导致两种细胞系中LIF和LIFR水平升高。在原发性脊索瘤肿瘤样本中，发现TNFR1和LIFR水平呈正相关。此外，评估了LIF和TNF-a对脊索瘤细胞系和原发肿瘤样品中PD-L1基因表达的影响。我们发现，与未处理的细胞相比，长期TNF-a处理增加了两种细胞系中PD-L1的水平。LIF治疗未导致PD-L1表达的显着变化。在原发性肿瘤样品中，发现TNF-a和LIF表达水平与PD-L1表达水平正相关。
    　　使用Spearman等级相关性检查患者来源的脊索瘤样品中TNF-a和TNFR1基因表达水平与临床病理学特征之间的任何关系。通过这样做，发现肿瘤样品中的Ki67表达水平与TNF-a和TNFR1表达水平正相关。此外，发现TNF-a和TNFR1表达水平在群组中呈正相关，并且肿瘤体积与TNFR1水平正相关。另外，我们发现了TNFR1表达水平与ZEB2正相关，与E-钙粘蛋白表达水平呈负相关。在我们的队列中，TNF-a或TNFR1表达水平与发病年龄，转移，存活或复发无关，但高中性粒细胞与淋巴细胞比率（N/L比值）与复发呈正相关和短的存活时间。
    　　另外，通过IHC分析石蜡包埋的脊索瘤组织样品中TNF-a和TNFR1的表达。我们发现TNF-a和TNFR1的表达与我们的患者队列中的复发呈正相关，并且肿瘤体积与TNFR1表达相关。同样，在TNF-a和TNFR1表达水平之间观察到正相关。Kaplan-Meier生存分析显示TNF-a和TNFR1表达均与总体存活率降低相关。
    肿瘤相关巨噬细胞（TAM）占人类癌症中大部分肿瘤浸润性白细胞。高水平的浸润与不良的临床结果相关。虽然最初认为是对抗肿瘤的机构，它已经发现，白细胞浸润可以传播肿瘤形成和随身携带到更先进的阶段。在脊索瘤中，已发现这种浸润与转移相关。
    　　TNF-a与IL-1和IL-6一起是肿瘤浸润后白细胞分泌到细胞外空间中最显着的细胞因子之一。在肿瘤促进炎症的情况下，已经发现LIF与VEGF，CSF1，IL-4，IL-6和IL-10在募集巨噬细胞和调节细胞外环境中起主要作用，导致转化。白细胞进入TAMs。这些TAM和其他浸润的细胞在肿瘤微环境中分泌许多因子，包括TNF-a，其引起血管生成，侵袭，肿瘤生长，转移和免疫抑制。先前的研究结果表明TNF-a可能由肿瘤细胞和肿瘤相关细胞产生。还发现TNF-a通过建立炎症微环境参与肿瘤细胞生长，并通过作用于TNFR1和TNFR2促进细胞存活，而TNFR1和TNFR2又诱导抗细胞凋亡途径。
    有趣的是，肿瘤浸润细胞抑制肿瘤部位的免疫功能。在无菌炎症条件下，白细胞中MHCII类分子的产生受到肿瘤细胞衍生的TGF-B1，IL-10和PGE2的抑制。已经发现肿瘤微环境中的IL-10和TNF-a诱导卵巢癌中PD-L1的表达，导致TAM直接抑制免疫应答。在脊索瘤中，已发现PD-L1水平与转移相关，并且白细胞的肿瘤浸润增加。值得注意的是，在目前的研究中，我们发现TNF-a处理的脊索瘤细胞表现出增加的PD-L1表达水平。而且，我们发现了PD-L1在脊索瘤患者队列中，表达与LIF和TNF-a表达相关。我们还观察到IPA升高的TNF-a水平和经典IL-10途径的活化。这些发现表明涉及TNF-a，IL-10和PD-L1相互作用的重要网络可能在脊索瘤中起作用，在肿瘤微环境中引起免疫抑制作用。CSF-1和TNF-a生成的肿瘤细胞已经报道招募产生金属蛋白酶2，3,7和9的TAM，和局部浸润在这些噬细胞已被发现伴随肿瘤细胞。在这里，我们发现短期和长期TNF-a治疗对脊索瘤细胞具有相似和不同的作用。两种类型的治疗都增加了脊索瘤细胞迁移和侵袭的能力。短期治疗后出现早期间充质标志物，长期治疗后发现晚期间充质标志物ZEB2丰富，如预期的那样。在原发性患者样品中，发现TNFR1的表达与ZEB2相关并且与E-钙粘蛋白表达呈负相关。已知抑制E-钙粘蛋白的ZEB2以NF-κB依赖性方式上调。因此，似乎TNF-a/TNFR1/NF-kB/ZEB2/E-CAD轴有助于脊索瘤的发展。发现T（Brachyury）表达水平响应于长期和短期TNF-a处理而下降。短期TNF-a暴露细胞中的T表达水平可通过QNZ治疗可逆地升高，而长期治疗使该过程不可逆。T是脊索瘤中的间充质和诊断标志物。另外，T作为重要的治疗靶点。在这里我们发现，尽管TNF-a处理使细胞在形态水平上向间充质状态移动，但在分子水平上，间充质标记物T的表达下降。这可能意味着T对脊索瘤EMT和E-钙粘蛋白的抑制并不重要，CK19和EMA，以及ZEB2的过表达为EMT的发生提供了充分的手段。有趣的是，在去分化脊索瘤中发现了低水平的T，这是该病最先进的类型。这可能是另一个迹象表明TNF-a暴露可能促进脊索瘤细胞的转化并诱导更具攻击性的行为。T依赖性的丧失可能与脊索瘤细胞去分化有关，尽管需要进一步的研究来验证这一选择。
    　　如基于微阵列的表达数据所示，短期TNF-a处理的样品显示出与TNF-a直接相关的模式，例如增加的TNFR2信号传导。在长期TNF-a处理的细胞中，观察到类似的效果，以及血管生成和癌症干细胞相关途径的激活，包括涉及Wnt3a下游基因的途径。这些结果进一步支持了我们提出的脊索瘤转移模型，其涉及肿瘤促进炎症作为潜在原因，由促炎细胞因子如LIF和TNF-a引起。在我们的患者队列中，发现TNF-a和TNFR1水平与几种临床病理学特征相关。虽然在我们的研究中，TNF-a治疗对脊索瘤细胞没有短期的体外作用，但在体内都是如此TNF-a和TNFR1表达水平被认为与Ki67的表达，这在许多类型的癌症的预后意义相关联。该观察结果可能是由于细胞长期暴露于肿瘤微环境中的TNF-a以及各种其他细胞因子和其他因素。此外，我们发现TNFR1表达水平与肿瘤大小相关。在之前的一项研究中，发现LIF水平与脊索瘤患者的肿瘤体积和短存活时间相关。在我们的队列中，TNFR1和LIFR发现表达水平正相关，用TNF-a和LIF处理脊索瘤细胞增加了它们各自及其受体的表达水平。这些发现表明TNF-a和LIF可能在炎性脊索瘤肿瘤微环境中协同作用。根据我们的IHC结果，我们得出结论，TNF-a和TNFR1与脊索瘤存活显着相关，因此它们可能作为候选预后因素。
    　　几项研究已经表明，TNF-a可以增加两者LIF和PD-L1的表达。这种三重相关性表明这些分子与其下游基因之间的潜在关系与脊索瘤中的肿瘤促进炎症有关，这可能是疾病进展的驱动因素。此外，发现高N/L比率与我们的患者队列中的肿瘤复发和降低的总体存活率显着相关。先前的研究已经表明，高N/L比率可以指示一个存活时间短和癌症复发。由中性粒细胞释放的TNF-a也促进肿瘤微环境中中性粒细胞的募集。因此，TNF-a分泌和中性粒细胞募集可能具有协同作用，并且可能表明脊索瘤患者的预后不良。
    　　只有少数研究报道了脊索瘤中潜在的促肿瘤炎症的影响。我们目前的研究结果表明，检查肿瘤促炎症可能值得详细阐明脊索瘤进展的机制。肿瘤炎症途径在TNF-a处理后升高，并且可能与侵袭性状如EMT，迁移，侵袭和集落形成的增加有关。此外，我们发现TNF-a和TNFR1的表达与总体存活率相反，可能作为预后因素。需要进一步的研究来评估潜在的治疗药物或联合治疗对抗脊索瘤进展，化疗耐药和复发的功效。
 
出国看病概况

海外医疗在国外发展较为成熟，比如在欧美等医疗技术发达国家，很多医院都设有国际病人办公室并配备多语种医学专业翻译人员，就医流程和模式都已相对成熟。在国内，海外医疗虽然还属于新兴行业，但发展势头迅猛，发展潜力巨大，市场前景广阔。
　　 从中国经济发展水平和消费能力预测，未来10年时间，海外医疗市场及其相关产业的市场的巨大潜力，有可能超过数百亿美元。
出国看病适应症